Библиотека диссертаций Украины Полная информационная поддержка
по диссертациям Украины
  Подробная информация Каталог диссертаций Авторам Отзывы
Служба поддержки




Я ищу:
Головна / Ветеринарні науки / Ветеринарна мікробіологія та вірусологія


Ксьонз Ігор Миколайович. Застосування полімеразної ланцюгової реакції для діагностики хламідіозу свиней: Дис... канд. вет. наук: 16.00.03 / УААН; Полтавський філіал ін-ту ветеринарної медицини. - Полтава, 2002. - 215арк. - Бібліогр.: арк. 146-156.



Анотація до роботи:

Ксьонз І.М. Застосування полімеразної ланцюгової реакції для діагностики хламідіозу свиней. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук за спеціальністю 16.00.03 – ветеринарна мікробіологія та вірусологія. Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини УААН, Харків, 2002.

В дисертації викладено результати досліджень по застосуванню та науково-експериментальному обгрунтуванню методу полімеразної ланцюгової реакції для діагностики хламідіозу свиней з застосуванням наборів реагентів, призначених для діагностики хламідіозу людини, розробці методів відбору проб клінічного матеріалу для ПЛР-аналізу від свиней різних статевих і вікових груп та вивченню діагностичної цінності цього методу.

Проведені успішні випробування методу ПЛР для діагностики хламідіозу свиней в лабораторному та польових дослідах, а також розроблені схеми оздоровчих заходів проти цієї інфекції.

Розроблені “Методичні рекомендації по діагностиці хламідіозу свиней методом полімеразної ланцюгової реакції з використанням набору фірми “Літех” затверджені Головою Державного департаменту ветеринарної медицини Міністерства аграрної політики України.

1. У дисертації наведено нове вирішення проблем лабораторної діагностики хламідіозу свиней. Існуючі насьогодні методи недостатньо ефективні, що в значній мірі пов’язано з їх низькою чутливістю і специфічністю, тривалістю та трудомісткістю проведення досліджень.

Впровадження методу ПЛР для діагностики хламідіозу в практику лабораторій ветеринарної медицини дає можливість постановки точного діагнозу на дане захворювання за короткий час (4 – 4,5 год) при дослідженні проб клінічного або патологічного матеріалу, відібраного від свиней усіх вікових і статевих груп в будь-якій стадії розвитку інфекційного процесу, включаючи латентний перебіг, а також виявлення хламідієносіїв.

2. Порівняльним аналізом секвенованих послідовностей нуклеїнових кислот гена, який кодує 16S рибосомальної РНК Chlamydia trachomatis, Chlamydia suis і Сhlamydiophila psittaci, виявлено рівень гомології 93 %, що свідчить про консервативність вказаного гена для різних видів збудника хламідіозу.

3. Дослідженням специфічних та контрольних хламідійних антигенів для РЗК і орнітозних алергенів для внутрішньошкірної проби, 6 проб патологічного матеріалу від поросят-гнотобіотів з досліду по експериментальному відтворенню хламідіозу та 530 проб біоматеріалу від 442 свиней різних вікових та статевих груп встановлено, що для діагностики хламідіозу свиней за методом ПЛР є придатним набір реагентів “Полімік”
ТУ-9398-405-17253567-96 виробництва Московської науково-виробничої фірми “Літех”, призначений для діагностики хламідійних інфекцій людини, в якому підібрана система праймерів, комплементарних ділянкам генів, що кодують 16S рибосомальної РНК хламідії.

4. Дослідження специфічних та контрольних хламідійних антигенів для РЗК і орнітозних алергенів для внутрішньошкірної проби свідчать про високу чутливість і специфічність методу ПЛР. Індикація ДНК хламідій відбувається в розведеннях специфічних антигенів у 1000 – 8000 разів вищих за граничний титр розведень в РЗК при відсутності в контрольних препаратах.

5. Порівняння результатів досліджень на хламідіоз проб клінічного матеріалу від інфікованих свиней за загальновживаними методами і результатами ПЛР свідчать, що чутливість РЗК складає 27 %, методу виділення і культивування хламідій на білих мишах та курячих ембріонах 90 %, мікроскопічного 70 % в порівнянні з результатами ПЛР, які прийняті за 100 %.

6. Встановлено, що для прижиттєвої діагностики хламідіозу за методом ПЛР придатні зскрібки з слизової оболонки статевих органів або прямої кишки та супернатант 10–20 % відцентрифугованих супензій сперми, зависі фекалій, а від загиблих та забитих свиней і аборт-плодів - супернатант відцентрифугованих 10 % суспензій з біоптатів (шматочки головного мозку, легень, селезінки, печінки та нирок) на фізіологічному розчині.

7. В експерименті по штучному відтворенню хламідіозу на поросятах-гнотобіотах встановлено, що розвиток інфекції протікає без прояву клінічних ознак (температура тіла і показники загального аналізу крові знаходяться в межах фізіологічної норми) та видимих патологоанатомічних змін в органах. Разом з тим, гістологічними дослідженнями встановлено що хламідії викликають набряк мозкової тканини, потовщення стінок кровоносних судин та розширення навколосудинних просвітів головного мозку, розширення міжальвеолярних перетинок та потовщення стінок кровоносних судин легень.

8. На основі розроблених схем лікувально-оздоровчих заходів при хламідіозі свиней і контролю їх ефективності по індикації збудника за методом ПЛР встановлено, що високий терапевтичний ефект забезпечує 2-3-кратне внутрім’язове введення антибіотиків тетрациклінового ряду пролонгованої дії з інтервалом в 5 – 7 діб.

9. За результатами впровадження методу ПЛР для виявлення хламідій у свиней розроблені “Методичні рекомендації по діагностиці хламідіозу свиней методом полімеразної ланцюгової реакції з застосуванням набору фірми “Літех”, які затверджені Головою Державного департаменту ветеринарної медицини Міністерства аграрної політики України.

Публікації автора:

1. Ксьонз І.М. Застосування методу полімеразної ланцюгової реакції для діагностики хламідіозу у кнурів-плідників // Вісник СДАУ. – Суми – 1999.- Вип. 4. - С. 113-115.

2. Ксьонз І.М. Експериментальне відтворення хламідіозу свиней на поросятах-гнотобіотах // Міжвідомч. темат. наук. зб. “Ветеринарна медицина”. - Харків: ІЕКВМ УААН.- 1999.- Вип. 76. - С. 68-71.

3. Ксьонз І.М. Хламідійна інфекція свиноматок та альтернативний метод її діагностики // Вісник ПДСІ. – Полтава. - 2000.- Вип. 5. - С. 41-42.

4. Ксьонз І.М., Балацький В.М., Метлицька О.І. Експрес-метод діагностики хламідіозу свиней // Тваринництво України. - 2000.- № 11. - 12.- С. 21.

Дисертант приймав безпосередню участь в модифікації, випробуванні та впровадженні методу ПЛР для діагностики хламідіозу свиней.

5. Ксьонз І.М. Полімеразна ланцюгова реакція як альтернативний метод діагностики хламідійних інфекцій свиней // Матер. Всеукр. наук.-практ. конф. молод. вчених “Проблеми патології тварин та шляхи її вирішення”. – К., ІВМ УААН.- 2000.- С. 25-29.

6. Настенко В.Д., Гавшин О.О., Хандкарян В.М., Ксьонз І.М., і ін. Новий біотехнологічний метод діагностики хламідіозу свиней та його переваги // Ветеринарна медицина України – 2001.- №3.- С. 36-37.

Дисертант провів дослідження по діагностиці хламідіозу свиней за методом ПЛР і загальноприйнятими лабораторними методами.

7. Ксьонз І.М. Застосування полімеразної ланцюгової реакції для діагностики інфекційних захворювань на прикладі ПЛР-аналізу хламідіозу свиней // Тези ІІІ Міжнарод. конф. “Біоресурси та віруси”. – К..- 2001. – С. 31.

8. Ксьонз І.М., Настенко В.Д., Курман А.Ф. і ін. Методи відбору проб для ПЛР-аналізу хламідіозу свиней // Проблеми зооінженерії та ветеринарної медицини. – Харків, ХДЗВА. -2001. – Вип. 9 (33). - Част. 1. – С. 113–118.

Дисертант розробив і випробував методи відбору проб для діагностики хламідіозу свиней за ПЛР-методом.