Анотація до роботи:

Найдьонов В.Г. Вивчення методом сайт-направленого мутагенезу елементів впізнавання тирозинової тРНК тирозил-тРНК синтетазою з вищих еукаріотів. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.03 – молекулярна біологія. – Інститут молекулярної біології і генетики НАН України, Київ, 2002.

Дисертаційна робота присвячена вивченню структурних елементів впізнавання тирозинової тРНК печінки бика гомологічною тирозил-тРНК синтетазою в реакції аміноацилювання з використанням методу сайт-направленого мутагенезу. Показано, що роль першої пари акцепторного стебла як детермінанти відповідності тирозинової тРНК, пов’язана головним чином з нуклеотидом у позиції 72.

З’ясовано, що нуклеотиди 34 и 35 антикодону вносять вклад у відповідність тирозинової тРНК, але менший, ніж нуклеотиди першої пари, в той час як довжина варіабельної петлі не впливає на акцепторні властивості транскрипту. Встановлено, що додатковий С-кінцевий домен тирозил-тРНК синтетази покращує каталітичну ефективність аміноацилювання тРНК-транскрипту, вірогідно за рахунок підсилювання зв’язування останнього з ферментом. Виявлено критичне значення амінокислотного залишку лізин-147 для активності тирозил-тРНК синтетази печінки бика в аміноацилюванні гомологічної тРНК.

1. У дисертаційній роботі досліджено роль окремих структурних елементів тирозинової тРНК та тирозил-тРНК синтетази печінки бика в реакції аміноацілювання. Сконструйовано та клоновано штучний ген тирозинової тРНК печінки бика. Із застосуванням сайт-направленого мутагенезу отримано гени тРНК^Tyr бика з нуклеотидними замінами в першій парі акцепторного стебла, в антикодоновому триплеті та ділянці варіабельної петлі.

Методами стаціонарної кінетики проведено дослідження впливу нуклеотидних замін на кінетичні параметри реакції аміноацилювання мутантних тРНК^Tyr-транскриптів рекомбінантною тирозил-тРНК синтетазою печінки бика.

2. Показано, що основною структурною детермінантою відповідності тРНК^Tyr-транскрипту в ділянці першої пари акцепторного стебла є нуклеотид в позиції 72, в той час як роль нуклеотиду в позиції 1 є значно меншою.

3. Визначено, що нуклеотиди 34 і 35 антикодону є важливими детермінантами відповідності тРНК^Tyr-транскрипту. Отримані результати свідчать про те, що в реакції аміноацилювання еукаріотичною тирозил-тРНК синтетазою антикодоновий триплет тРНК^Tyr-транскрипту впізнається в межах 39 кДа каталітичного модуля ферменту.

4. Продемонстровано, що довжина варіабельної петлі тРНК^Tyr-транскрипту несуттєва для впізнавання еукаріотичною тирозил-тРНК синтетазою в реакції аміноацилювання.

5. Встановлено, що додатковий С-кінцевий домен тирозил-тРНК синтетази бика збільшує каталітичну ефективність реакції аміноацилювання тРНК^Tyr-транскрипту за рахунок підвищення спорідненості останнього до ферменту.

6. Показано, що амінокислотний залишок Lys147, який локалізований у сполучному пептиді нуклеотидзв’язувального домену є критичним для активності тирозил-тРНК синтетази бика в реакції аміноацилювання гомологічної тРНК^Tyr.

Публікації автора:

1. Найденов В.Г., Вудмаска М.И., Koрнелюк A.И., Maцукa Г.Х. Сайт-направленный мутагенез остатков лизина, локализованных в соединительном пептиде нуклеотидсвязывающего домена (свертки Россмана) тирозил-тРНК синтетазы из печени быка // Биополимеры и клетка. – 2000. – Т.16, №4. – С. 275-279.

2. Найденов В.Г., Вудмаска М.И., Мацука Г.Х. Кинетические параметры аминоацилирования тРНК^Tyr транскрипта тирозил-тРНК синтетазой из печени быка // Біополімери і клітина. – 2001. – Т.17, №6. – С. 534-539.

3. Найденов В.Г., Вудмаска М.И., Мацука Г.Х. Роль нуклеотидов в позициях 1 и 72 акцепторного стебля тРНК^Tyr в аминоацилировании тирозил-тРНК синтетазой печени быка // Біополімери і клітина. – 2002. – Т.18, №1. – C. 71-75.

4. Levanets O.V., Naidenov V.G.,Odynets K.A., Vudmaska M.I., Matsuka G.Kh., Wientjes F. J., Gassen H.G., Kornelyuk A.I. Cloning, seguensing and bacterial expression of bovine tyrosyl-tRNA synthetase // Abstracts of EMBO Workshop on Structure and Function of Aminoacyl synthetases. – Mittelwihr (France). – 1998. – Р.100.

5. Naidenov V.G., Vudmaska M.I., Matsuka G.Kh. The role of G72 for tRNA^Tyr identity //Abstracts of Asilomar Conference on Aminoacyl-tRNA synthetases in Biology, Medicine and Evolution. – Pacific Grove (USA). – 2002. – P.109.