Іванова Вікторія Джанівна. Використання пластівцевоутворюючого фактора для діагностики інфекцій стафілококової етіології: дисертація канд. біол. наук: 03.00.09 / Київський національний ун-т ім. Тараса Шевченка. - К., 2003.
Анотація до роботи:
Іванова В.Д. Використання пластівцевоутворюючого фактора для діагностики інфекцій стафілококової етіології. – Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.09 – імунологія. Київський національний університет імені Тараса Шевченка, Київ, 2003.
Дисертацію присвячено дослідженню гуморальної імунної відповіді на пластівцевоутворюючий фактор (ПлФ) у хворих на стафілококову інфекцію та визначенню цінності цього антигену для діагностики інфекцій стафілококової етіології. Проведено експерименти з оптимізації експресії гена clfA S. aureus, що кодує ПлФ, у клітинах E. coli XLI-Blue. На основі штаму E. coli BL21(DE3)Gold сконструйовано систему для конститутивної експресії рекомбінантного ПлФ, перевагами якої є простота ферментації та низька собівартість процесу культивування штаму-продуцента.
За допомогою твердофазного імуноферментного аналізу (ТІФА) проаналізовано сироватки хворих на кістково-гнійну інфекцію, інфекцію верхніх дихальних шляхів та здорових донорів різних вікових категорій щодо рівня та афінності антитіл до ПлФ. Встановлено, що при стафілококовій інфекції відбувається підвищення титру та афінності анти-ПлФ-антитіл, а виявлення їх у сироватці крові має діагностичне та прогностичне значення, що зумовлює використання ПлФ в ТІФА для діагностики інфекцій стафілококової етіології. На основі рекомбінантного ПлФ розроблено експериментальну модель системи ТІФА для виявлення антитіл до ПлФ, що впроваджена в роботу лабораторії мікробіології та хіміотерапії інституту травматології та ортопедії АМН України і використовується в межах комплексного дослідження для встановлення стафілококової етіології захворювань.
Доведено, що виявлення антитіл до пластівцевоутворюючого фактора S. aureus у сироватці крові має діагностичне та прогностичне значення, що зумовлює використання пластівцевоутворюючого фактора в імуноферментному аналізі для діагностики інфекцій стафілококової етіології.
За допомогою імуноферментного аналізу встановлено, що антитіла класу G до пластівцевоутворюючого фактора S. aureus наявні у сироватках здорових донорів, титр їх коливається від 1:50 до 1:800 і не залежить від віку.
Встановлено, що при стафілококовій інфекції відбувається підвищення титру антитіл, специфічних до пластівцевоутворюючого фактора: у хворих на стафілококову інфекцію середні значення титру антитіл до пластівцевоутворюючого фактора є вірогідно вищими (1 : 1055 – при остеомієліті, 1 : 400 – при гаймориті) за цей показник у здорових осіб (1 : 188). Достовірність різниці за вказаним показником у хворих на кістково-гнійну стафілококову інфекцію та інфекцію верхніх дихальних шляхів вказує на існування залежності між рівнем гуморальної імунної відповіді на цей антиген та локалізацією інфекції.
Показано, що титри антитіл до пластівцевоутворюючого фактора, вищі за 1 : 800, визначені за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу, можуть слугувати надійним діагностичним критерієм при підтвердженні стафілококової етіології захворювань. Нижчі за 1 : 800 титри антитіл, що співвідносяться з клінічними ознаками захворювання, також мають діагностичне значення і повинні враховуватись під час динамічного спостереження.
У хворих на кістково-гнійну стафілококову інфекцію сироваткові анти-ПлФ-антитіла є високоафінними із значеннями константи дисоціації, що вірогідно вищі за такі 90 % здорових донорів. Для здорових людей характерна наявність у сироватці крові високо- та низькоафінних антитіл до пластівцевоутворюючого фактора. Залежності між титрами анти-ПлФ-антитіл та їх афінністю не виявлено.
Досягнута ефективна експресія рекомбінантного пластівцевоутворюючого фактора в системі E. coli XLI-Blue (біля 30 % всіх клітинних білків) за рахунок розробленої схеми культивування штаму-продуцента.
На основі штаму E. coli BL21(DE3)Gold сконструйовано систему для конститутивної експресії рекомбінантного пластівцевоутворюючого фактора, перевагами якої є простота ферментації та низька собівартість процесу культивування штаму-продуцента.
Публікації автора:
Іванова В.Д., Позур В.К. Структура та біологічні властивості пластівцевоутворюючого фактора золотистого стафілокока // Биополимеры и клетка. – 2000. – Т. 16, №2. – С.99-107.
Іванова В.Д., Позур В.К. Антигенні властивості фібриногензв‘язуючих білків та їхня роль у патогенезі стафілококових інфекцій. Фібриногензв‘язуючі білки клітинної стінки // Біополімери і клітина. – 2002. – Т.18, №1. – С.26-36.
Іванова В.Д., Позур В.К. Антигенні властивості фібриногензв‘язуючих білків та їхня роль у патогенезі стафілококових інфекцій. Зовнішньоклітинні фібриногнезв‘язуючі білки // Біополімери і клітина. – 2002. – Т.18, №4. – С. 272-278.
Іванова В.Д., Позур В.К., Бідненко С.І., Лютко О.Б., Раєвська Г.Є., Пилипенко В.Г. Антитіла до пластівцевоутворюючого фактора Staphylococcus aureus у хворих на кістково-гнійну інфекцію // Біополімери і клітина. – 2002. – Т.18, №5.– С.445-448.
Іванова В.Д., Позур В.К., Раєвська Г.Є., Пилипенко В.Г., Бідненко С.І., Лютко О.Б. Рівень гуморальної імунної відповіді на пластівцевоутворюючий фактор у хворих на стафілококову інфекцію // Імунологія та алергологія. – 2002. – №4. – С.34-38.
Іванова В.Д., Позур В.К. Оптимізація експресії рекомбінантного пластівцевоутворюючого фактора Staphylococcus aureus у клітинах E.coli XLI-Blue // Тези конференції-конкурсу молодих вчених “Актуальні проблеми фундаментальної та прикладної біохімії – 2001”. – Київ Україна. – Український біохімічний журнал. – 2002. – Т. 74, №1. – С. 139-140.
Ivanova V.D. Effective expression of recombinant Staphylococcus aureus clumping factor in E.coli cells and it immunobiological activity // Conference for students, PhD students and young scientists on molecular biology and genetics. Dedicated to the establishment of Ukrainian Society for molecular biology. – Kyiv (Ukraine). – 2001. – P.96.
Иванова В.Д, Позур В.К., Пилипенко В.Г., Раевская Г.Е. Определение антител к хлопьеобразующему фактору у больных стафилококковыми инфекциями и здоровых людей // Тези VIII Українського біохімічного з‘їзду. – Чернівці (Україна).–Український біохімічний журнал (спеціальний випуск). – 2002. – т.74, №4б (додаток 2). – С.158-159.
