Бабенко Наталя Миколаївна. Вплив різних режимів кріоконсервування на структурно-функціональні властивості ембріональних нервових клітин in vivo та in vitro: дисертація канд. біол. наук: 03.00.19 / НАН України; Інститут проблем кріобіології та кріомедицини. - Х., 2003.
Анотація до роботи:
Бабенко Н.М. Вплив різних режимів кріоконсервування на структурно-функціональні властивості ембріональних нервових клітин in vivo та in vitro.-Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.19 – кріобіологія.- Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України, Харків, 2003.
Дисертація присвячена вивченню особливостей впливу умов кріоконсервування, таких як вид та концентрація кріопротектора, склад розчину кріоконсервування, швидкість охолоджування-відігрівання на морфофункціональні властивості ембріональних нервових клітин (ЕНК). Експериментальні дослідження проведено з метою оцінки у порівняльному аспекті кріоконсервованих та нативних ЕНК з використанням двох модельних систем – культивування останніх in vitro та після введення тваринам з індукцією експериментального алергійного енцефаломієліту як аналога розсіяного склерозу людини. Описано характер росту та морфологічні зміни кріоконсервованих ЕНК у залежності від терміну розвитку експлантатів, складу живильного середовища та типу культуральної системи. Відзначено, що успіх проведеної терапії ембріональними клітинами визначається як вихідним статусом трансплантату, так і фазою розвитку імунозапального процесу. Наведено дані про особливості дії кріоконсервованих ЕНК у порівнянні з нативними при введенні щурам з ЕАЕ, насамперед різного ступеня корекції клініко-неврологічних, імунологічних та метаболічних порушень, що може свідчити про модифікацію антигенного спектру та зміну здатності ЕНК до продукції регуляторних цитокінів після кріоконсервування.
Створення запасів кріоконсервованих ЕНК, які використовують для лікування нейродегенеративних і травматичних ушкоджень нервової системи, дотепер залишається актуальною проблемою. Не вирішеними є питання, що стосуються як оптимізації режиму кріоконсервування, так і відпрацьовування методів оцінки структурно-функціональної організації кріоконсервованого матеріалу. Вирішенню саме цих актуальних питань присвячена дана дисертаційна робота.
Розроблено режим заморожування ЕНК зі швидкістю 1 град/хв і проведенням температурної ініціації кристалоутворення, що в порівняльному аспекті з іншими режимами кріоконсервування (двохетапне заморожування з постійною швидкістю 1/хв і триетапна програма з температурною зупинкою при –25С) забезпечує найбільшу збереженість основних морфологічних і функціональних характеристик ЕНК у системі in vitro та in vivo.
ЕНК людини 10-11 тижнів гестації і щурів 11 діб розвитку мають подібний морфологічний і субпопуляційний склад, вихідний рівень збереженості після виділення і динаміку розвитку при культивуванні в умовах in vitro, що дозволяє використовувати ЕНК щурів зазначеного терміну гестації як модельну систему при подальшій оптимізації умов їхнього кріоконсервування.
Установлено факт наявності різного ступеня змін адгезивної здатності кріоконсервованих за різними режимами ЕНК у порівнянні з нативними, що може бути обґрунтуванням одержання матеріалу з різними властивостями для вирішення різних експериментальних задач.
Ефективність культивування кріоконсервованих ЕНК залежить як від складу живильного середовища, так і умов культивування. Уведення до складу середовища інсуліну (0,2 Ед/мол) і глюкози (600 мг%) забезпечує оптимальні умови росту ЕНК. Наявність фідерного шару сприяє пролонгуванню терміну їхнього культивування з реалізацією програми дендрогенезу і формуванням зрілих форм нейронів.
Клініко-неврологічний та імунологічний статус щурів з ЕАЕ при введенні кріоконсервованих ЕНК має особливості в порівнянні з його характеристиками при використанні нативних ЕНК. Уведення кріоконсервованих ЕНК на 7 і 14 добу індукції ЕАЕ за більшістю клініко-лабораторних показників призводило до більш вираженої інтегральної мінімізації патологічного процесу.
Відпрацьовано і запропоновано як діагностичну тест-систему оцінки ступеня сенсибілізації ІКК до енценфалітогенних структур до і після введення тваринам з ЕАЕ нативних і кріоконсервованих ЕНК з використанням культури ЕНК. Установлено, що введення кріоконсервованих ЕНК на 7 добу знижує число специфічно сенсибілізованих лімфоцитів на 58,1±2,3%, на 14 добу на 68,1 ±3,1% у порівнянні з групою тварин з ЕАЕ.
Різний характер і ступінь відповіді систем організму, прояву терапевтичного ефекту після введення в ті самі терміни, і в аналогічних дозах нативних і кріоконсервованих ЕНК тваринам з ЕАЕ свідчить про те, що кріоконсервування може виступати в ролі фактора спрямованої регуляції структурно-функціонального стану цього біооб’єкту.
Публікації автора:
Бабенко Н.Н., Вотякова И.А., Лобынцева Г.С. Особенности пролиферации и дифференцировки нативных и криоконсервированных эмбриональных нервных клеток человека. Сообщение 1. Клеточный состав мозга эмбрионов человека 5-13 недель гестации // Пробл. криобиологии.- 1998.- №1.- С. 35-40 (Дисертантом проведено фарбування та аналіз препаратів ЕНК людини різних строків гестації).
Бабенко Н.Н. Особенности пролиферации и дифференцировки нативных и криоконсервированных эмбриональных нервных клеток человека. Сообщение 2. Подбор оптимальных условий культивирования нативных клеток эмбрионального мозга человека // Пробл. криобиологии. - 1999. - №1.- С. 39-45.
Грищенко В.И., Гольцев А.Н., Бабенко Н.Н. Экспериментальный аллергический энцефаломиелит как возможная модель изучения механизма действия продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса при лечении аутоиммунных заболеваний // Пробл. криобиологии. - 2002. - №2. - С. 34-43.
Гольцев А.Н., Гурина Т.М., Бабенко Н.Н., Останков М.В. Влияние различных режимов криоконсервирования на некоторые характеристики эмбриональных нервных клеток // Пробл. криобиологии.- 2003.- №1.-С.46-50. (Дисертантом відпрацьовано методику проведення повільного заморожування з проведенням температурної ініціації кристалоутворення).
Гольцев А.Н., Бабенко Н.Н. Обоснование возможности использования эмбриональных нервных клеток при лечении органоспецифических аутоиммунных заболеваний // Пробл. криобиологии.- 2003.- №2.- С.49-61. (Дисертантом проведено експерименти щодо впливу трансплантації нативних і кріоконсервованих ЕНК щурам з ЕАЕ на клініко-неврологічний і імунологічний статус реципієнтів).
Патент України 58192А, МПК 7 С12N5/08. Спосіб культивування ембріональної нервової тканини / Грищенко В.І., Гольцев А.М., Бабенко Н.М., Дубрава Т.Г.- Заявл. 24.10.2002; Опубл. 15.07.2003, Бюл. №7.-2 с.
Сипитый В.И., Чмут В.А., Егоркина О.В., Лобынцева Г.С., Вотякова И.А., Бабенко Н.Н. Реконструктивно-восстановительные операции при травматическом повреждении спинного мозга и его корешков // Бюл. укр. асоц. нейрохірургів.-1998.- №6.- с. 32-33.
Гольцев А.Н., Бабенко Н.Н. Органотипическое культивирование как метод оценки функциональной активности эмбриональной ткани мозга // Пробл. криобиологии. - 2002. - №1. - С.127-128
Гольцев А.Н., Овсянников С.Е., Козлова Ю.А., Бабенко Н.Н., Рассоха И.В., Бондарович Н.А. Изучение характера взаимодействия между степенью развития аутоиммунных заболеваний и интенсивностью перекисного окисления липидов // Укр. біохім. журн.- 2002.- т.74.- № 4а (додаток 1).- С.123
Babenko N.N., Kozlova Ju.A., Goltsev A.N., Ovsyannikov S.E., Ostankova L.V. Possibility of correction of experimental allergic encephalomyelitis with embryofetoplacental complex products // Збірник тез III Міжнародної конференції студентів та молодих вчених “Медицина-здоровя-XXI сторіччя”.- Дніпропетровськ.- 2002.-С. 292
Козлова Ю.А., Бабенко Н.М., Гольцев А.М., Овсянніков С.Е. Вивчення корелятивного ваємозвязку між ступенем розвитку експериментального алергійного енцефаломієліту та інтенсивністю пероксидного окислення ліпідів // Укр. біохім. журнал.-2002.- т.74.- № 4.-С.156
Гольцев А.Н., Гурина Т.М., Бабенко Н.Н., Цогоєва Л.М. Возможность использования нативных и криоконсервированных эмбриональных нервных клеток (ЭНК) в качестве корректоров экспериментального аллергического энцефаломиелита (ЭАЭ) //Збірник тез Ш міжнародної науково-практичної конференції “Наука і соціальні проблеми суспільства: медицина, фармація, біотехнологія”.- Харків.-2003.- С.251.
Гольцев А.Н., Рассоха И.В., Горская А.Ю., Бабенко Н.Н. Коррекция состояния центрального органа иммунитета - тимуса продуктами эмбриофетоплацентарного комплекса при аутоиммунных заболеваниях // Збірник тез науково-практичної конференції “Сучасні напрямки розвитку ендокринології (Другі Данілевські читання)”.- Харків.- 2003.- С.46.
Гольцев А.М., Бабенко Н.М., Останкова Л.В., Луценко О.Д. Застосування кріоконсервованих продуктів ембріофетоплацентарного комплексу (ПЕФПК) як коректорів аутоімунних захворювань на моделі експериментального алергійного енцефаломіеліта (ЕАЕ) // Трансплантологія.- 2003.- т.4.- №1.- С. 207-209
