Дунаєва Ольга Вікторівна. Підвищення життєздатності кріоконсервованих статевих клітин півнів : дис... канд. біол. наук: 03.00.13 / УААН; Інститут тваринництва. - Х., 2005.
Анотація до роботи:
Дунаєва О.В. Підвищення життєздатності кріоконсервованих статевих клітин півнів. – Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.13 – фізіологія людини і тварин. – Інститут тваринництва УААН, Харків, 2005.
У роботі проведено порівняльні дослідження кріозахисної й цитотоксичної дії на фізіологічні процеси у сперміях півнів вивчених вперше 27 композицій кріопротекторів. Запропоновано використання суміші трьох кріопротекторів диметилформаміду, 1,2-пропандіолу і етиленгліколю у співвідношенні компонентів 1:1:1.
Встановлена специфічність впливу кріопротекторів на окремі органели сперміїв. Удосконалені технологічні засоби підготовки сперми півнів до низькотемпературної консервації. Експериментально обґрунтовано вплив температури розбавлення сперми та введення у неї кріопротектора на життєздатність сперміїв півнів. Розроблено склад нового кріозахисного середовища, який дозволяє підвищити збереженість сперміїв півнів, особливо у діапазоні плюсових температур. Розроблено спосіб визначення морфо-функціонального стану сперміїв при кріоконсервації сперми півнів шляхом їх диференційного забарвлення сумішшю барвників родаміна С і малахітового зеленого.
Комплексне застосування розроблених нових технічних рішень забезпечує збереженість життєздатності у 64,5% сперміїв півнів після їх кріоконсервації.
Внаслідок проведених досліджень по вивченню цитофізіологічних процесів, які відбуваються у спермі півнів при використанні нового захисного середовища, нової кріопротекторної суміші, удосконалених прийомів підготовки статевих клітин до заморожування, суттєво підвищена результативність технології низькотемпературної консервації сперми півнів. Комплексне застосування розроблених нами технічних рішень забезпечує одержання у розмороженій спермі не менш 64,5% життєздатних сперміїв, що на 14,5 – 30,0% більше, ніж досягається в інших відомих технологіях кріоконсервації сперми півнів.
Розроблено нове захисне середовище “Д”, наступного складу (г/100мл Н2O): глутамат натрію – 1,90, фруктоза – 0,50, інозит – 0,25, ацетат магнію – 0,07, ацетат калію – 0,50, полівінілпірролідон (М.м. 12000) – 0,20, протамін сульфат – 0,028, оксид ванадію (V) – 0,07, сульфат марганцю – 0,07. Осмотичність 365 мОсмоль; рН 6,7. Це середовище забезпечує високу життєздатність сперми півнів до заморожування, а також має високу кріозахисну активність при додаванні до неї кріопротектора в оптимальній концентрації.
Встановлено, що найбільшу кріопротекторну дію має розроблена нами кріопротекторна суміш, яка складається з диметилформаміду, 1,2-пропандіолу та етиленгліколю у співвідношенні 1:1:1, та має 8%-ву кінцеву концентрацію.
При розробці нової кріопротекторної суміші встановлено, що диметилформамід викликає в основному пошкодження акросом сперміїв півнів, 1,2-пропандіол та 2,3 бутандіол – мембран голівок сперміїв, етиленгліколь – шийок і хвостів сперміїв, 2-метоксіетанол – морфо-функціональні ушкодження хвостів.
Удосконалено технологію кріоконсервації сперми півнів. Визначено, що для одержання більш високих результатів збереженості клітин щойно одержану сперму півнів необхідно охолоджувати протягом 15-20 хв. до 20-25 єС, потім розбавляти у співвідношенні 1:1 середовищем “Д” і охолоджувати до 4єС протягом 30-40 хвилин. Після цього сперму необхідно ще раз розбавити у співвідношенні 1:1 середовищем “Д”, яке містить розроблену нами суміш кріопротекторів у 24% концентрації, що забезпечує їх 8%-ву кінцеву концентрацію в розбавленій спермі. Заморожування сперми проводять у пластикових пайєтах за режимом, розробленим в Інституті птахівництва.
Розроблено метод оцінки якості сперми, який дозволяє оцінити морфо-функціональний стан сперміїв півнів шляхом їх диференційного забарвлення сумішшю барвників родаміну С та малахітового зеленого на всіх етапах процесу кріоконсервації.
Встановлено, що дворазове розбавлення сперми захисним середовищем у співвідношенні 1:1:2 дозволяє підвищити збереженість сперміїв після заморожування-відтавання до 10 - 14%, у порівнянні з дворазовим розбавленням у співвідношенні 1:1:1, що дає можливість збільшити кількість спермодоз.
Публікації автора:
1. Линник Т.П., Бизикина О.В. Криоконсервирование спермы петухов. I. Цитотоксичность диолов и амидов // Пробл. Криобиологии. – 2001. - №2. – С. 72 – 79. (Здобувачем особисто проведено експерименти, вивчено цитотоксичність амідів і діолів, проаналізовано одержані результати.)
2. Линник Т.П., Бизикина О.В. Цитотоксичность и криопротекторная активность диолов, амидов и их смесей при криоконсервировании спермы петухов // Пробл. Криобиологии. – 2001. - №3. – С. 50. (Здобувачем особисто проведено експерименти, досліджена кріозахисна активність сумішей кріопротекторів на базі амідів і діолів, проведено статистичний аналіз одержаних результатів.)
3. Линник Т.П., Бизикина О.В. Криоконсервирование спермы петухов. II. Криозащитная активность диолов и амидов // Пробл. Криобиологии. – 2001. - №4. – С. 43-51.(Здобувачем особисто проведено експерименти, досліджено вплив структури амідів і діолів на цитофізіологічний стан сперміїв, проведено статистичний аналіз і узагальнено результати.)
4. Бізікіна О.В., Артеменко О.Б., Ліннік Т.П. Використання різних класів кріопротекторів при кріоконсервуванні спермии півнів // Птахівництво: Міжвід. темат. наук. зб. (Матеріали III Української конференції по птахівництву з міжнародною участю, 15 – 19 вересня, 2001р., м.Алушта, АР Крим). – Харків, 2001. - Вип.51. – С14-18. (Здобувачем особисто проведено досліження по вивченю впливу сумішей кріопроекторів амідів і діолів на життєздатність сперміїв півнів, проведено аналіз одержаних результатів.)
5. Бизикина О.В., Линник Т.П. Криоконсервирование спермы петухов. III. Цитотоксичность и криопротекторная активность смеси N,N- диметилформамида с диолами // Пробл. Криобиологии. – 2002. - №1. – С. 39-44.(Здобувачем особисто досліджено вплив сумішей аміду та діолів на їх кріозахисну активність, проведено статистичний аналіз і проаналізовано результати.)
6. Дунаєва О.В., Артеменко О.Б., Бичко С.В., Терещенко О.В. Збереженість сперміїв півнів у залежності від сольового складу розчинника // Проблеми зооінженерії та ветеринарної медицини: Зб. наук. пр./ ХДЗА. – 2002. – Вип.10(34). – С.118-120. (Здобувачем особисто проведено експерименти по вивченню впливу солей натрію на рухомість, морфо-функціональну цілісність сперміїв півнів, проведено аналіз одержаних результатів.)
7. Артеменко А.Б., Терещенко А.В., Дунаева О.В. Влияние частоты осеменения кур заморожено-оттаянной спермой на оплодотворённость яиц // Птахівництво: Міжвід. темат. наук. зб. (Матеріали IV Української конференції по птахівництву з міжнародною участю, 15 – 19 вересня, 2003р., м.Алушта, АР Крим). – Харків, 2003. - Вип.53. – С.372 – 375.( Здобувачем особисто проведено експерименти.)
8. Пат. 8277 Україна, МКИ 7 A61D19/02. Спосіб визначення морфо-функціонального стану сперміїв при кріоконсервуванні сперми півнів: Пат. 8277 Україна, МКИ 7 A61D19/02. Дунаєва О.В., Дунаєв Ю.К., Стегній Б.Т. (Україна) - № u 2005 02274; Заявл. 14.03.2005; Опубл. 15.07.2005, Бюл. № 7 - 3 c. (Розроблений особисто здобувачем.)
