Анотація до роботи:

Ширяєв М. В. Особливості взаємодії деяких білків ссавців з мелітином і ліпофорином комах. - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.04 – біохімія. – Таврійський національный університет ім. В. І. Вернадського, Сімферополь, 2002.

Дисертація присвячена вивченню взаємодії мелітину із отрути бджоли і ліпофорину гемолімфи комах з білками сироватки крові ссавців. В роботі показано, що мелітин звязується переважно з F_c-фрагментом молекули IgG. Мелітин також підсилює специфічну взаємодію антиімуноглобулінових антитіл зі своїми антигенами і взаємодію С1q субкомпоненту комплементу з IgG. Дані ефекти в умовах in vivo, можливо, призводять до активації класичного шляху комплементу і розвитку анафілактоїдних реакцій на бджолину отруту. Показано, що сироватковий альбумін інгібує мелітин-індукований лізис еритроцитів (на відміну від IgG і С1q), але активує витік гемоглобіну із еритроцитів (проінкубованих 10–11 днів при +4С) під впливом сублітичних концентрацій мелітину. Вивчено антигену специфічність моноклональних антитіл до ліпофорину гемолімфи імаго Zygaena minos. За результатами досліджень розроблено оригінальну методику побудови філогенетичних дерев з використанням імунохімічних критеріїв і запропоновано зміни в систематиці роду Zygaena Fabricius, 1775 (Lepidoptera, Zygaenidae).

1. За допомогою іонообмінної хроматографії на колонці з ДЕАЕ-трисакрилом М створено нову модифікацію методики розділення папаїнових фрагментів поліклональних імуноглобулінів G людини. Одержано чисті препарати імуноглобулінів і папаїнових фрагментів імуноглобулінів, які використано для вивчення їх взаємодії з мелітином із отрути бджоли.

2. Показано, що мелітин взаємодіє з поліклональними IgG сироватки крові та їх папаїновими фрагментами. Результати експериментів свідчать про те, що мелітин звязується переважно з F_c-фрагментом молекули IgG.

3. За допомогою твердофазного імуноферментного аналізу продемонстровано, що мелітин впливає на специфічну взаємодію антиімуноглобулінових антитіл зі своїми антигенами. При цьому не виявлено неспецифічної взаємодії імуноглобулінів під впливом мелітину.

4. Мелітин взаємодіє з Clq субкомпонентом комплементу, що призводить до значного підсилення реакції Clq з IgG, яку можна зареєструвати методом імуноферментного аналізу. Показано залежність підсилення мелітином специфічних IgG (антиген)-IgG (антитіло) і Clq-IgG взаємодій від рН та іонної сили буферного розчину. Висловлено припущення про значення підсилення мелітином вказаних взаємодій у виникненні у людини системних реакцій на бджолину отруту.

5. Показано, що сироватковий альбумін інгібує мелітин-індукований лізис еритроцитів, a IgG і Clq не проявляють значного інгібуючого ефекту. Разом з тим, сироватковий альбумін також активує витік гемоглобіну із еритроцитів (проінкубованих 10–11 днів при +4С) під впливом сублітичних концентрацій мелітину. Це свідчить про наявність принаймні двох незалежних механізмів дії мелітину на еритроцитарну мембрану.

6. Одержані нами мишині моноклональні антитіла до ліпофорину гемолімфи імаго Zygaena minos з різною інтенсивністю взаємодіють з ліпофоринами різних видів роду Zygaena, що звязано з відмінностями в структурі антигенної детермінанти, яка виявляється у цих ліпофоринів.

7. За результатами вивчення антигенної специфічності одержаних моноклональних антитіл створено оригінальний метод побудови філогенетичних дерев з використанням імунохімічних критеріїв. Застосування даного методу імуносистематики дозволило запропонувати внесення змін в сучасну систематику роду Zygaena Fabricius, 1775 (Lepidoptera, Zygaenidae).

Публікації автора:

1. Ефетов К. А., Ширяев Н. В. Получение моноклональных антител к липофорину гемолимфы Zygaena minos ([Denis & Schiffermller], 1775) (Lepidoptera, Zygaenidae) // Таврический медико-биологический вестник. – 1998. – № 1–2. – С. 12–15.

2. Ефетов К. А., Ширяев Н. В. Изучение филогенетических взаимоотношений видов рода Zygaena Fabricius, 1775 (Lepidoptera, Zygaenidae) c помощью моноклональных антител к липофорину // Таврический медико-биологический вестник. – 1998. – № 3–4. – С. 44–48.

3. Ефетов К. А., Ширяев Н. В. Изменение антигенсвязывающей функции антител в присутствии мелиттина из яда пчелы (Apis mellifera L.) // Таврический медико-биологический вестник. – 2001. – № 1–2.– С. 108–114.

4. Ефетов К. А., Ширяев Н. В. Усиление взаимодействия IgG c C1q в присутствии мелиттина как возможная причина анафилаксии при действии пчелиного яда // Укр.биохим.журн. – 2001. – Т.73, № 5. – С. 49–54.

5. Ефетов К. А., Ширяев Н. В. Методика очистки моноклональных иммуноглобулинов на ДЭАЭ-Трисакриле М // Идеи И. И. Мечникова и развитие современного естествознания: Тез. докл. Междужнар. науч. конф., посвященной 150-летию со дня рожд. И. И. Мечникова. – Харьков. – 1995. – С. 110–111.

6. Ефетов К. А., Ширяев Н. В. Очистка миеломных парапротеинов методом ионообменной хроматографии // Тез. докл. II съезда онкологов стран СНГ (Онкология 2000). – Киев: Экспериментальная онкология. – 2000. – Vol. 22, Suppl. – N 227.

7. Efetov K. A., Shiryayev N. V. Monoclonal antibodies to lipophorin of Zygaena minos ([Denis & Schiffermller], 1775) (Lepidoptera: Zygaenidae) // Abstracts of X th European Congress of Lepidopterology. – Miraflores de la Sierra (Madrid, Spain). – 1996. – P. 76.