Пішко Ольга Володимирівна. Осмотична поведінка ооцитів і ембріонів миші на різних етапах кріоконсервування : дис... канд. біол. наук: 03.00.19 / НАН України; Інститут проблем кріобіології і кріомедицини. - Х., 2005.
Анотація до роботи:
Пішко О.В. Осмотична поведінка ооцитів і ембріонів миші на різних етапах кріоконсервування.- Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.19 – кріобіологія. – Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України, Харків, 2005.
Дисертаційна робота присвячена вивченню осмотичної поведінки ооцитів і ембріонів миші на різних етапах кріоконсервування та визначенню транспортних параметрів клітин.
Показано, що стадія розвитку суттєво не впливає на значення коефіцієнта проникності плазматичних мембран ембріонів для молекул води. Не встановлено вірогідних відмінностей коефіцієнтів проникності мембран 1- та 2-клітинних ембріонів для молекул етиленгліколю (виміряних у розчинах 10%-ї концентрації), і тільки для 8-клітинного ембріона спостерігається тенденція до зниження цього показника. Встановлено, що запліднення і стадія розвитку не впливають на коефіцієнт проникності плазматичних мембран ембріонів миші для молекул 1,2-пропандіолу в межах перших трьох дроблень.
Обґрунтовано використання етиленгліколь-сахарозного кріо-консервуючого середовища для заморожування чутливих до дії факторів кріопошкодження 2-клітинних ембріонів миші.
Вивчення процесів масообміну між клітиною та оточуючим середовищем на головних етапах кріоконсервування дозволяє визначити біофізичні параметри клітин і за допомогою фізико-математичного моделювання прогнозувати різні кріобіологічні ситуації, що складає основу оптимізації режимів кріоконсервування біологічних об’єктів. В дисертації проведено дослідження осмотичних реакцій ооцитів і ембріонів миші у розчинах етиленгліколю і 1,2-пропандіолу та моделювання осмотичної поведінки клітин на різних етапах кріоконсервування; обґрунтовано використання етиленгліколю для кріоконсервування двоклітинних ембріонів миші.
Визначено коефіцієнти проникності плазматичних мембран 1-, 2- і 8-клітинних ембріонів миші для молекул води і двох проникаючих кріопротекторів (етиленгліколю і 1,2-пропандіолу). Показано, що проникність мембран ембріонів для молекул 1,2-пропандіолу в 1,5 рази вище, ніж для молекул етиленгліколю.
Встановлено, що запліднення і стадія розвитку ембріонів (у межах перших двох дроблень) не впливають на коефіцієнти проникності плазматичних мембран для молекул води і досліджуваних кріопротекторів із 10%-ю концентрацією.
Коефіцієнти проникності мембран зигот миші для молекул етиленгліколю збільшуються з ростом концентрації кріопротектора, тоді як для 2-клітинних ембріонів коефіцієнт проникності не залежить від концентрації кріопротектора.
На основі фізико-математичного моделювання обґрунтована доцільність використання непроникаючої добавки в середовищі заморожування та у середовищі відмивання; показано, що причини різної кріочутливості при повільному заморожуванні ранніх ембріонів миші можуть бути пов’язані з меншим поверхнево-об'ємним відношенням 1- і 2-клітинних ембріонів в порівнянні з 8-клітинними ембріонами.
Встановлено, що використання кріоконсервуючого середовища, в склад якого входять 5,37 М етиленгліколю і 0,7 М сахарози та швидкого заморожування забезпечує збереженість і життєздатність більш 60% 2-клітинних ембріонів.
Показано, що дегідратація ембріонів у розчині непроникаючої речовини не є достатньою умовою для виключення внутрішньоклітинної кристалізації.
Охолодження з малими швидкостями забезпечує можливість вітрифікації поза- і внутрішньоклітинного середовища ембріонів у розчині, що містить 5,37 М етиленгліколю і 0,7 М сахарози і використовується при швидкому заморожуванні.
Публікації автора:
Смольянинова Е.И., Хроменкова О.Б., Жерноклев Г.В., Пишко О.В. Влияние эквилибрации в среде замораживания на осмотическую устойчивость и жизнеспособность 8-клеточных эмбрионов мыши // Проблемы криобиологии. – 2004. – №1. – С.3-11.
Пишко О.В. Влияние концентрации етиленгликоля на проницаемость мембран одно- и двухклеточных эмбрионов мыши // Проблемы криобио-логии. – 2004.–№2. – С.56-61.
Пишко О.В., Смольянинова Е.И., Коваленко И.Ф., Коваленко С.Е., Розанов Л.Ф. Прогнозирование осмотического поведения эмбрионов мыши на основных этапах криоконсервирования // Проблемы криобиологии. – 2004. – №3. – С.3-8.
Пишко О.В., Смольянинова Е.И., Коваленко И.Ф., Розанов Л.Ф. Проницаемость мембран ооцитов и эмбрионов мыши для молекул 1,2-пропандиола и повреждающее действие его концентрированных растворов // Проблемы криобиологии. – 2004. – №4. – С.3-7.
Кулешова Л.Г., Пишко О.В. Криомикроскопический анализ замораживания эмбрионов мыши ранних стадий развития // Проблемы криобиологии. – 2005. – Т.15, №2. – С.119-128.
Пишко О.В., Смольянинова Е.И., Коваленко И.Ф., Розанов Л.Ф. Проницаемость мембран ооцитов и эмбрионов ранних стадий развития для воды и двухатомных спиртов // Тези доповідей І Української наукової конференції «Проблеми біологічної і медичної фізики». – Харків, 2004. – С.123.
Пишко О.В., Смольянинова Е.И., Розанов Л.Ф. Подготовка эмбрионов мыши к процедурам медленного и быстрого замораживания с применением проникающих криопротекторов // Материалы Международной конференции „Сохранение генетических ресурсов”.– Санкт-Петербург, 2004.– С.835.
