Яремчук Ірина Митодіївна. Надшвидке заморожування та відтавання ембріонів корів з використанням мембраностабілізуючих речовин : дис... канд. с.-г. наук: 03.00.20 / Інститут біології тварин УААН. — Л., 2007. — 162арк. : іл., табл. — Бібліогр.: арк. 127-159.
Анотація до роботи:
Яремчук І.М. Надшвидке заморожування та відтавання ембріонів корів з використанням мембраностабілізуючих речовин. – Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата сільськогосподарських наук за спеціальністю 03.00.20.– біотехнологія. – Інститут біології тварин УААН. – Львів, 2007.
Дисертація присвячена вивченню впливу умов надшвидкого заморожування ембріонів великої рогатої худоби на їх морфофункціональні властивості, життєздатність та приживлення у реципієнтів. Встановлено, що вітрифікаційне середовище з вмістом у ньому 25,0 % гліцерину, 40,0 % сахарози та 35,0 % культурального середовища з 20,0 % фетальною сироваткою забезпечує 77,2 % життєздатності деконсервованих ембріонів та 47,0 % їх приживлення у реципієнтів. Оптимальними стадіями розвитку ембріонів для заморожування надшвидким методом є компактні морули, ранні та експандовані бластоцисти.
Розроблено та експериментально перевірено ефективний “Спосіб підвищення якості деконсервованих ембріонів заморожених надшвидким методом”. Встановлено, що короткотривале культивування ембріонів після розморожування у середовищі для культивування з фосфоліпідним комплексом сприяє відновленню фізіологічних властивостей ембріонів та підвищує їх приживлення після трансплантації на 13,6 %.
Розроблено вітрифікаційне середовище з композиційними кріопротекторами поліфункціональної дії, вплив яких проявляється у забезпеченні нативних властивостей цитоплазматичних мембран у процесі дегідратації клітин. Додавання до складу середовища мембраностабілізуючих речовин, зокрема холін - хлориду у концентрації 0,3 % та препарату “Філомек” у концентрації 0,2 %, підвищує стійкість ембріонів до надшвидкого охолодження, забезпечує понад 90,0 % їх збереження після деконсервування та приживлення у реципієнтів на рівні 55,0 – 60,0 %.
Встановлено, що введення в організм корів-донорів під час гормональної обробки вітаміну Е та комплексу фосфоліпідів підвищує активність ферментів антиоксидантної системи, сприяє нормалізації обмінних процесів у репродуктивних органах тварин, забезпечує 72,3 % виходу повноцінних ембріонів, підвищує їх життєздатність після деконсервування до 91,2 % і приживлення у реципієнтів на рівні 54,8 %.
У дисертації теоретично обґрунтовано та подано нове вирішення доцільності кріоконсервування ембріонів великої рогатої худоби надшвидким методом з урахуванням їх стадій розвитку. Вивчено дію мембраностабілізуючих речовин у складі середовищ для заморожування і деконсервування, та вплив антиоксидантних препаратів при внутрішньом’язовому введенні донорам на ембріопродуктивність, життєздатність та приживлення ембріонів у реципієнтів.
1. Кріозахист репродуктивних клітин визначається вмістом у вітрифікаційному середовищі кріопротекторів ендо- і екзоцелюлярної дії та оптимальних швидкостей охолодження. Вітрифікаційне середовище з вмістом 25,0 % гліцерину і 40,0 % сахарози забезпечує 77,2 % життєздатності ембріонів великої рогатої худоби та 47,0 % їх приживлення у реципієнтів.
2. Оптимальними стадіями розвитку ембріонів для заморожування надшвидким методом є компактні морули, ранні та експандовані бластоцисти, трансплантація яких забезпечує приживлення у реципієнтів на рівні 52,0 – 57,0 %. При трансплантації ембріонів відмінної якості тільність реципієнтів досягає 80,0 %, доброї – 54,5 %, задовільної – 27,3 %.
3. Культивування ембріонів протягом 36 годин у середовищі з додаванням препарату “Філомек” у концентрації 0,2 %, забезпечує виражену мембраностабілізуючу та регенераційну дію, що дозволяє відновити до нормального рівня фізіологічні функції у 91,6 % ембріонів, дає можливість регенерувати пошкоджені, при кріоконсервуванні, компоненти мембран клітин, у результаті чого підвищується виживання ембріонів після розморожування на 16,6 %.
4. Короткотривале культивування деконсервованих ембріонів після заморожування надшвидким методом, у середовищі з фосфоліпідним комплексом “Філомек”, сприяє відновленню фізіологічних функцій ембріонів та підвищує їх приживлення після трансплантації на 13,6 %.
5. Комплексне внутрішньом’язове введення коровам-донорам під час гормональної обробки природного антиоксиданту вітаміну Е та фосфоліпідного препарату “Філомек” підвищує активність ферментів антиоксидантної системи: глутатіонпероксидази і каталази (р<0,05 – 0,01), вірогідно зменшується утворення продуктів перекисного окиснення ліпідів (малоновий діальдегід р<0,001), що забезпечує 72,3 % виходу повноцінних ембріонів, підвищує їх життєздатність після деконсервування до 91,2 % і приживлення у реципієнтів на рівні 54,8 %.
6. Введення до складу кріоконсерванта композиційних кріопротекторів поліфункціональної дії та мембраностабілізуючих речовин, зокрема, холін - хлориду у концентрації 0,3 % та препарату “Філомек” у концентрації 0,2 %, підвищує стійкість ембріонів до надшвидкого охолодження, забезпечує понад 90,0 % їх збереження після деконсервування та приживлення у реципієнтів на рівні 55,0 - 60,0 %.
7. Заморожування ембріонів надшвидким методом з використанням мембраностабілізуючих речовин (препарату “Філомек” та холін-хлориду) забезпечує 91,6 % їх збереження та 60,0 % приживлення у реципієнтів, при програмному заморожуванні відповідно – 84,6 і 54,5 %. Це вказує на доцільність широкого використання надшвидкого заморожування у технології трансплантації ембріонів великої рогатої худоби.
Публікації автора:
Довідник з репродуктивної біотехнології великої рогатої худоби / В.П. Буркат, В.В. Влізло, Р.Й. Кравців, С.Г. Шаловило, М.М. Шаран, М.Д. Пасіцький, А.В. Мадіч, А.А. Гамота, Л.В. Мадісон, В.В. Мадісон, І.М. Яремчук, В.О. Дудчак / За ред. С.Г. Шаловила – Львів, 2004. – 150 с. (Автор брала участь в організації, впорядкуванні та редагуванні довідника, а також написанні розділів “Лабораторна робота з ембріонами”, “Морфологічна оцінка якості ембріонів”, “Культивування ембріонів”, “Кріоконсервування ембріонів”).
Яремчук І.М., Шаловило С.Г. Заморожування ембріонів надшвидким методом з використанням різних концентрацій кріопротекторів // Науковий вісник Львівської нац. академії вет. медицини ім. С.З. Ґжицького. – Львів, 2001. – Т. 3, №4, Вип. 3. – С. 115-119. (Дисертантом проведено визначення оптимальної концентрації кріопротекторів у середовищі для заморожування ембріонів мишей та корів).
Яремчук І.М. Морфофункціональні властивості деконсервованих ембріонів заморожених надшвидким методом на різних стадіях їх розвитку // Науково-технічний бюлетень Інституту біології тварин. – Львів, 2001. – Вип. 1-2. – С. 307-309.
Яремчук І.М., Даценко З.М. Вплив фосфоліпідів на підвищення життєздатності деконсервованих ембріонів великої рогатої худоби // Науковий вісник Львівської нац. академії вет. медицини ім. С.З. Ґжицького. – Львів, 2002. – Т. 4, №3. – С. 125-129 (Дисертант особисто провела експериментальні дослідження, статистично опрацювала результати, проаналізувала отримані дані).
Яремчук І.М., Шаловило С.Г. Використання мембраностабілізуючих речовин у середовищах при розморожуванні ембріонів // Науково-технічний бюлетень Інституту біології тварин. – Львів, 2002. – Вип. 4, №1. – С. 171-173 (Дисертант особисто провела експериментальні дослідження, статистично опрацювала результати, проаналізувала отримані дані).
Яремчук И.М., Шаловило С.Г., Шаран Н.М. Усовершенствование среды для размораживания эмбрионов крупного рогатого скота // Сборник научно-технических трудов “К 55 - летию Института животноводства”. – РУП Институт животноводства НАН Беларуси. – Жодино, 2004. – Т. 36. – С. 170-173 (Дисертантом особисто проведено експериментальну частину, статистичну обробку результатів досліджень та їх аналіз).
Яремчук І.М., Шаловило С.Г. Підвищення кількісних та якісних показників ембріонів при введенні в організм корів-донорів вітаміну Е та комплексу фосфоліпідів // Вісник Дніпропетровського ДАУ (науково-теоретичний, науково-практичний журнал). – 2006. - №1. – С. 114-116 (Дисертант особисто провела дослідження, виконала аналіз і узагальнила результати).
Яремчук І.М., Шаловило С.Г. Вплив композиційних кріопротекторів поліфункціональної дії на збереженість ембріонів корів при надшвидкому заморожуванні // Розведення і генетика тварин. – Київ, 2007. – Вип. 41. – С. 302-307 (Дисертантом проведено експериментальні дослідження, статистичну обробку отриманих результатів та їх аналіз).
Пат. 62361 А Україна, UА 7 А61D19/04. Спосіб підвищення якості деконсервованих ембріонів заморожених надшвидким методом / І.М. Яремчук, С.Г. Шаловило, М.М. Шаран, М.Д. Пасіцький. - №2003032130; Заявлено 11.03.03; Опубл. 15.12. 03; Бюл. №12. – 2 с.
