Анотація до роботи:

Маляревський П.Ю. Моделювання ішемічного ушкодження мозку на органотиповій культурі гіпокампу та вивчення нейропротекторної дії L-фенілаланіну. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата медичних наук за спеціальністю 14.03.04. –патологічна фізіологія. – Інститут фізіології

ім.О.О.Богомольця НАН України, Київ – 2006.

Дисертація присвячена розробці моделі ішемічного ушкодження мозку на органотиповій культурі гіпокампу та пошуку нових ефективних засобів нейропротекції. Відомо, що ароматичні амінокислоти, а саме L-фенілаланін, має виражену нейропротективну дію, але механізми цієї дії вивчені недостатньо. Ми досліджували вплив L-фенілаланіну на життєздатність та морфологію СА1 нейронів культивованих зрізів гіпокампу в умовах експериментально викликаної ішемії. Проведена морфо-функціональна оцінка культивованих зрізів після киснево-глюкозної депривації (КГД) різної тривалості через 1, 4 і 24 години. Для тестування L-фенілаланіну була обрана короткотривала (10 хв.) КГД з часом спостереження 1 та 4 години. L-фенілаланін (100 мкМ) був присутнім у культуральному середовищі за 30 хв. до КГД, під час КГД та протягом реоксигенації. Оцінювали життєздатність клітин культивованих зрізів гіпокампа та морфологію нейронів СА1 зоні. Результати показали, що додавання L-фенілаланіну суттєво підвищувало життєздатність клітин, та зменшувало морфологічні ознаки ішемічного ушкодження. Таким чином, L-фенілаланін має протективну дію в умовах експериментально викликаної ішемії, що припускає потенційну можливість використання ароматичних амінокислот у медичній практиці з метою запобігання ішемічних ушкоджень мозку.

1. В дисертаційній роботі короткотривала киснево-глюкозна депривація була використана для моделювання ішемічного ушкодження мозку на органотиповій культурі гіпокампа. Ця модель застосовувалась для дослідження особливостей розвитку та механізмів ураження нервових клітин, а також для тестування нейропротекторних властивостей L-фенілаланіну.

2. На підставі аналізу морфо-функціональних змін нервових клітин органотипової культури гіпокампу в умовах киснево-глюкозної депривації за допомогою оцінки життєздатності зрізів (за рівнем цитозольного ферменту лактат-дегідрогенази у культуральному середовищі та забарвленням зрізів трипановим синім) та морфологічних змін СА1 нейронів гіпокампу (світлова мікроскопія) встановлено залежність життєздатності нейронів культивованих зрізів гіпокампу від тривалості киснево-глюкозної депривації та часу, що минає з моменту її припинення.

3. З’ясовано, що короткотривала (10 хвилин) киснево-глюкозна депривація є найбільш слушною для вивчення особливостей і механізмів ішемічного ушкодження нервової тканини при дефіциті кисню і глюкози та для виявлення нейропротекторної дії L-фенілаланіну.

4. Встановлено, що в умовах короткотривалої киснево-глюкозної депривації, ушкодження клітин культивованих зрізів гіпокампу пов’язане, як з глутаматною ексайтотоксичністю, так і з дією вільних радикалів.

5. Показано, що L-фенілаланін, у використаній концентрації, має виражену нейропротекторну дію в умовах моделювання ішемічного ушкодження на органотиповій культурі гіпокампу при додаванні його як за 30 хвилин до киснево-глюкозної депривації, так і при його введенні у культуральне середовище під час або відразу після киснево-глюкозної депривації.

6. Встановлено, що в умовах киснево-глюкозної депривації L-фенілаланін здійснює свій нейропротекторний вплив, частково через конкурентне зв’язування глутаматних рецепторів, а частково завдяки антиоксидантним властивостям.

Список опублікованих за темою дисертації робіт

Статті:

1. Lushnikova I.V., Voronin K., Malyarevskyy P.Y., Skibo G.G. Morphological and functional changes in rat hippocampal slice cultures after short-term oxygen-glucose deprivation // J.Cell. Mol.Med. – 2004. – Vol. 8, № 2. – Р. 241-248.

2. Лушнікова І.В., Воронін К.Ю., Маляревський П.Ю., Сможаник К.Г., Скибо Г.Г. Вплив киснево-глюкозної депривації різної тривалості на культивовані зрізи гіпокампа щурів // Фізіол. журн., – 2004. – Т.50, № 2, С. 94-100.

3. Лушнікова І.В., Воронін К.Ю., Маляревський П.Ю., Сможаник К.Г., Скибо Г.Г. Характеристика моделі ішемічного ушкодження гіпокампа in vitro // Клінічна та експериментальна патологія. – 2004. – Т. 3, № 2, Ч. 1. – С. 255-257.

4. Лушнікова І.В., Воронін К.Ю., Маляревський П.Ю., Скибо Г.Г. Ефекти короткотривалої киснево-глюкозної деривації у культивованих зрізах гіпокампу щурів // Науковий вісник Львівської національної академії ветеринарної медицини імені С.З. Гжицького. – 2004. – Т. 6, № 1, Ч. 2. – С. 208-213.

5. Маляревський П.Ю., Лушнікова І.В., Воронін К.Ю., Сможаник К.Г., Мартинюк А.Є., Скибо Г.Г. Проективна дія L-фенілаланіну в умовах експериментальної ішемії мозку на моделі культивованих зрізів гіпокампу // Запорожский медицинский журнал. – 2005. - № 6. – С. 102-105.

Тези доповідей:

1. Lushnikova I.V., Voronin K., Malyarevskyy P.Y., Berezin V.A., Bock E., Skibo G.G. Effects of mild ischemia on neuronal and synaptic plasticity in cell and slice cultures // Transmitters and guiding signals in the formation of cortical networks: 2nd INMED Conference (17-21 вересня 2003 р.). – La Ciotat, France: INMED, 2003. – Р.13.

2. Скибо Г.Г., Коваленко Т.Н., Осадченко І.А., Лушнікова І.В., Воронін К.Ю., Маляревський П.Ю. Нейродегенеративні зміни в гіпокампі при експериментальному ішемічному ушкодженні // Гістологія та ембріогенез периферійної нервової ситеми: Матеріали наукової конференції присвяченої 100-річчю з дня народження М.І.Зазибіна. –Київ: Національний медичний університет ім. О.О.Богомольця, 2004. – С. 59.

3. Malyarevskyy P.Y., Lushnikova I.V., Martynyuk A.E., Skibo G.G.. Protective effect of L-Phe in hippocampal slice culture exposed to oxygen-glucose deprivation // IBRO advanced school of neuroscience: abstract book. – Yalta: IASN 2004. – Poster 27.

4. Malyarevskyy P.Y., Lushnikova I.V., Martynyuk A.E., Skibo G.G. The study of protective properties of L-Phenylalanine on the model of stroke (hippocampal slice culture exposed to oxygen-glucose deprivation) // The journal of the European college of Neuropsychopharmacology. – 2005. – Vol. 15, Suppl. 2. – P. S260.

5. Маляревський П.Ю., Лушнікова І.В., Скибо Г.Г. Протективна дія L-фенілаланіну при експериментальній ішемії на культивованих зрізах гіпокампу // Наукова конференція молодих вчених “Актуальні проблеми старіння”: тези доповідей (28 січня 2005 р.). – Київ: Інститут геронтології АМН України, 2005. – С.106-107.

6. Malyarevskyy P.Y., Lushnikova I.V., Voronin K.Y., Martynyuk A.E., Skibo G.G. Neuroprotective action of L-Phenylalanine in rat hippocampal slice cultures // 5th international symposium on experimental and clinical neurobiology (19-22 вересня 2005р.). – Tatranska Lomnica, 2005. – Р. 65.