Анотація до роботи:

Петренко Ю.О. Кріконсервування клітин ембріональної печінки людини у багатокомпонентних кріозахисних середовищах. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.19 –кріобіологія. – Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України, Харків, 2006.

У дисертаційній роботі представлені морфологічні, фенотипічні і функціональні властивості ізольованих клітин ембріональної печінки (КЕП) людини до і після кріоконсервування з використанням комбінації проникаючих і непроникаючих кріопротекторів.

Кріоконсервування клітин зі швидкістю 1/хв до -80С під захистом 5% диметилсульфоксиду (ДМСО) дозволяло зберегти клітинний склад і імунобіологічні властивості КЕП, підвищити відносну кількість стовбурових кровотворних клітин і клітин-попередників. У той же час, кріоконсервування приводило до зниження збереженості і функціональної активності за відновленням Alamar Blue і за колонієутворюючою активністю. Застосування непроникаючих сполук, таких як ПЕО-8000 або сахароза, в якості додатків до кріозахисного середовища, що містить ДМСО, дозволяло отримати високі показники збереженості і життєздатності КЕП, а також знизити ефективну концентрацію ДМСО.

Перспективи застосування стовбурових клітин в експериментальних і клінічних дослідженнях визначають необхідність оптимізації методів їхнього кріоконсервування. У дисертації наведене теоретичне узагальнення та нове вирішення наукової проблеми щодо можливості застосування багатокомпонентних кріозахисних середовищ при кріоконсервуванні клітин ембріональної печінки людини .

1. Морфологічний і фенотипічний аналіз клітинного складу ембріональної печінки людини показав, що основну частину клітин складають представники гемопоетичного і гепатичного рядів, що мають різну стійкість до кріоконсервування.

2. Відновлення Аlamar Вlue є чутливим методом визначення життєздатності свіжоізольованих і кріоконсервованих клітин ембріональної печінки людини. Метод інтегрально відбиває цілісність плазматичних мембран, активність мітохондріальних і гліколітичних ферментів, а також інтенсивність проліферативних процесів.

3. Клітини ембріональної печінки людини характеризуються низькою імуногенністю, що зумовлено відсутністю зрілих форм лімфоцитів і здатністю інгібувати спонтанну і мітоген-стимульовану проліферацію лімфоцитів периферичної крові в змішаній культурі.

4. Оцінка ефективності ряду непроникаючих сполук у складі кріозахисних середовищ свідчить про перспективність комплексного застосування ДМСО і високомолекулярних поліетиленоксидів чи сахарози для кріоконсервування клітин ембріональної печінки людини.

5. Кріоконсервування під захистом ДМСО за відсутності чи в присутності непроникаючих сполук приводить до дворазового збільшення відносного вмісту кровотворних клітин-попередників у суспензії клітин ембріональної печінки людини.

6. Наявність ПЕО-8000 в кріозахисному середовищі з ДМСО забезпечує високу збереженість клітин ембріональної печінки людини після кріоконсервування, але інгібує їх колонієутворюючу активність.

7. Уведення сахарози до складу кріозахисного середовища, що містить ДМСО, значною мірою запобігає загибелі клітин ембріональної печінки людини в процесі кріоконсервування і зберігає їхню метаболічну і колонієутворюючу активності.

Публікації автора:

1. Петренко Ю.А., Тарасов А.И., Грищенко В.И., Петренко А.Ю. Влияние криоконсервирования на иммунологическую активность и фенотипический состав лимфоидных клеток эмбриональной печени человека // Пробл. криобиологии. – 2002. – № 4. – С. 76-79.

2. Петренко Ю.А. Криоконсервирование клеток эмбриональной печени человека с использованием ДМСО и высокомолекулярных полимеров //Пробл. криобиологии. – 2003. – № 3. – С. 80-87.

3. Петренко А.Ю., Грищенко В.И., Оченашко О.В., Петренко Ю.А. Трансплантация стволовых клеток – перспективное направление терапии XXI века. 3. Стволовые клетки печени//Межд. мед. журн. – 2003. – Т.9, №3. – С.121-126.

4. Петренко Ю.А., Горохова Н.А., Петренко А.Ю. Влияние высокомолекулярных соединений на жизнеспособность и функциональную активность клеток эмбриональной печени человека до и после криоконсервирования//Пробл. криобиологии. – 2005. – Т. 15, № 3. – С. 375 – 379.

5. Петренко Ю.А., Горохова Н.А., Сандомирский Б.П., Петренко А.Ю. Определение метаболической активности свежевыделенных и криоконсервированных клеток эмбриональной печени человека с помощью Alamar Blue-теста // Пробл. криобиологии. – 2005. – Т. 15, № 4. - С. 599-606.

6. Petrenko Yu.A., Gorokhova N.A., Tkachova E.N., Petrenko A.Yu. The reduction of Alamar Blue by peripheral blood lymphocytes and isolated mitochondria //Укр. Біохім. Журн. – 2005. – Vol. 77, № 5. – Р.100-105.

Пат. 58997 А Україна, МПК⁷ А01N1/02. Спосіб кріоконсервування гемопоетичних клітин. Грищенко В.І. Семіноженко В.П. Петренко О.Ю., Тарасов А.І., Петренко Ю.А., Грищук В.П., Дьомін Ю.А. Заявл. 03.12.02, Опубл. 15.08.03. - Бюл. Промисл. власність № 8. – С. 4.9.

7. Petrenko A.Yu., Petrenko Yu.A., Skorobogatova N.G., Improvement of some cryopreservation stages of suspensions enriched with stem haemopoietic cells// Meeting of the Society of Low Temperature Biology «Cryobiomol». - Coimbra, Portugal. – 2003. - Р. 155.

8. Петренко О.Ю., Петренко Ю.О., Оченашко О.В., Рязанцев В.В. Вивчення ембріональних клітин печінки людини в модельних системах //Трансплантологія. – 2003. – Т. 4, № 1. – С. 39-40.

9. Petrenko A.Yu., Grischenko V.I., Petrenko Yu.A., Skorobogatova N.G. Cellular hierarchy of human fetal liver cells //First Ukrainian Congress for Cell Biology. – Lviv. – 2004. – P. 147.

10. Petrenko Yu.A., Tarasov A.I., Jones D.R.E., Mazur S.P., Grischuk V.P., Petrenko A.Yu. The content, cryoresistance and experimental transplantation of red blood cell precursors derived from human fetal liver// European association of red cell research (EARCR) meeting. - Murten, Switzerland. – 2005. - P. 50.

11. Горохова Н.А., Петренко Ю.А. Alamar Blue-тест как метод определения жизнеспособности клеток до и после криоконсервирования // Проблемы криобиологии. – 2005. –Т. 15, № 4. - С. 728-729.