Сломінський Олександр Юрійович. Індукція каталітичної активності плазміногену моноклональним антитілом IV- 1C: дисертація канд. біол. наук: 03.00.04 / НАН України; Інститут біохімії ім. О.В.Палладіна. - К., 2003.
Анотація до роботи:
Сломінський О. Ю. Індукція каталітичної активності плазміногену моноклональним антитілом IV-1c. – Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.04 – біохімія. Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, Київ, 2003.
Проведено дослідження механізмів індукції каталітичної активності плазміногену моноклональним антитілом IV-1c і обгрунтовано використання моноклональних антитіл відповідної специфічності як моделі вивчення таких механізмів. Вивчено вплив фізико-хімічних факторів на процес індукції каталітичної активності, визначено стабільність комплексу та основні параметри процесу індукції. Досліджено залежність швидкості індукції від концентрації протонів у середовищі. Встановлено неможливість індукції каталітичної активності плазміногену за відсутності міцної взаємодії С-кінцевого лізину важкого ланцюга моноклонального антитіла з лізин-зв’язуючими ділянками плазміногену. Продемонстровано, що процесу індукції каталітичної активності передує перехід Глу-плазміногену до відкритої, Ліз-подібної конформації. Виявлено залежність цього процесу від катіонного складу середовища. За допомогою визначення енергії активації процесу доведено наявність значних конформаційних перебудов комплексу плазміноген–моноклональне антитіло IV-1c, які передують індукції каталітичної активності. Інгібування індукції фізіологічним інгібітором плазміну a2-антиплазміном демонструє наявність експонованої у молекулі плазміногену “класичної” каталітичної тріади (Сер-Гіс-Асп) активного центру плазміну вже на початку швидкої (другої) фази реакції активації.
Результати дослідження механізмів індукції каталітичної активності плазміногену моноклональним антитілом IV-1c дозволили вперше запропонувати схему реакції, яка, можливо, є універсальною для активаторів плазміногена непрямої дії. Схему можна представити як ряд реакцій, які відбуваються послідовно та частково одночасно: утворення комплексу Глу-плазміноген–моноклональне антитіло за механізмом взаємодії антитіла з епітопом, перехід плазміногену до Ліз-подібної конформації, взаємодія лізин-зв’язуючої ділянки плазміногену з С-кінцевим залишком лізину гамма-ланцюга моноклонального антитіла, експозиція активного центру, здатного гідролізувати активаційний зв’язок молекули плазміногену. Схема враховує можливість наявності проміжних активаторних комплексів та існування позитивного зворотнього зв’язку.
Дослідження некаталітичних активаторів плазміногену та механізмів індукції каталітичної активності серинових протеїназ є значною мірою ускладненими через високу швидкість цього процесу. Індукція каталітичної активності плазміногену моноклональним антитілом IV-1c, завдяки подібності механізмів некаталітичної активації та відносно невеликій швидкості цього процесу, перетворює комплекс Глу-плазміноген-моноклональне антитіло IV-1c на зручну модель вивчення “непрямої” активації проферментів серинових протеїназ.
Доведено, що початковою фазою індукції некаталітичним антиплазміногеновим моноклональним антитілом IV-1c каталітичної активності Глу-плазміногену є його перехід до відкритої Ліз-подібної конформації, який значною мірою залежить від фізико-хімічних умов середовища.
Встановлено, що енергія активації процесу для лаг-фази та другої фази реакції становить 19 і 40 ккал/моль відповідно. Надзвичайно висока енергія активації другої фази реакції свідчить за одночасний перебіг декількох процесів.
Показано, що друга фаза реакції індукції каталітичної активності ефективно інгібується a2-антиплазміном з І50% рівною 0,86 пмоль, що є свідченням на користь повної експонованості на цей час активного центру плазміногену комплексу.
Доведено, що індукція каталітичної активності не є реакцією зі стовідсотковим результатом. Імовірність експозиції активного центру серинової протеїнази комплексу є статистичною. В разі моноклонального антитіла IV-1c вона становить 20 відсотків.
Запропоновано схему реакції, яка має таку послідовність: утворення комплексу Глу-плазміноген–моноклональне антитіло IV-1c за механізмом антиген-антитіло; перехід Глу-плазміногену до відкритої Ліз-подібної конформації; взаємодія лізин-зв’язуючих ділянок плазміногену з С-кінцевим лізином гамма-ланцюга антитіла IV-1c; конформаційна перебудова молекули плазміногену з повною експозицією активного центру.
Список опублікованих праць за темою дисертації.
Сломинский А. Ю. Каталитические свойства Glu-плазминогена в комплексе с моноклональным антителом IV-1c // Укр. біохім. журнал. – 1999. – Т. 71 № 4. – С. 113-115.
Сломінський О. Ю., Макогоненко Є. М., Колеснікова І. М., Седерхольм-Вільямс С. А. Особливості активації плазміногена в комплексі з антиплазміногеновим моноклональним антитілом IV-1c. // Укр. біохім. журнал. – 1999. – Т. 71, № 5. – С. 44-50.
Особистий внесок здобувача – одержання чистих антитіл, характеристика препарату антитіл, визначення впливу на процес індукції конформації проферменту та визначення швидкості некаталітичної активації, взято безпосередню участь в обговоренні, підготовано публікацію.
Макогоненко Є. М., Яковлев С. О., Сломінський О. Ю., Корольчук В. І., Гриненко Т. В., Соколовська Л. І., Дружина Н. М., Колесникова І. М., Чернишов В. І., Седерхольм-Вільямс С. А. Активація плазміногену антиплазміногеновим моноклональним антитілом IV-1c. Властивості та механізм реакції // Укр. біохім. журнал. – 2000. – Т. 72, № 4-5. – С. 99-108.
Особистий внесок здобувача – одержання чистих антитіл, характеристика препарату антитіл, дослідження впливу фізико-хімічних умов середовища на індукцію каталітичної активності плазміногену моноклонального антитіла IV-1c, здатності a2-антиплазміну інгібувати плазміноген в комплексі з моноклональним антитілом, залежності швидкості реакцій від концентрацій компонентів або комплексу, індукція каталітичної активності антитілом різних форм плазміногену, участь у визначенні енергії активації процесу індукції каталітичної активності плазміногену та впливу температури на процес індукції, формулювання схеми реакції, взято безпосередню участь у обговоренні та підготовці публікації;
Яковлев С. О., Макогоненко Є. М., Корольчук В. І., Сломінський О. Ю., Колесникова І. М., Седерхольм – Вільямс С. А. Механізм утворення комплексу між плазміногеном і антиплазміногеновим моноклональним антитілом IV-1c // VII Український біохімічний з’ізд, Київ – 1997. – Ч. 1. – С. 31.
T. N. Platonova, E. M. Makogonenko, T. M. Chernishenko, A. Yu. Slominsky, S. A. Cederholm-Williams. Fragment E1 of fibrin induces catalytic activity in prothrombin and factor X // XVIII International Symposium Thrombosis and Haemostasis, Paris, France – 2001. – Suppl. CD3478.
Makogonenko E., Slominsky A., Sokolovskaja L and Cederholm-Williams S-A. Properties of reaction of Glu-Pg activation by antiplasminogen monoclonal antibody IV-1c // XVth International Congress on Fibrinolysis & Proteolysis, Hamamatsu, Japan – 2000. – Vol. 4, Suppl. 1. – P-94. – P 71.
