43. Орлов Сергій Миколайович. Імуногенність і антигенність інактивованих емульсин-вакцин проти інфекційного епідидиміту баранів із штамів Brucella abortus та Brucella ovis: дис... канд. вет. наук: 16.00.03 / УААН; Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини. - Х., 2004.
Анотація до роботи:
Орлов С.М. Імуногенність і антигенність інактивованих емульсин-вакцин проти інфекційного епідидиміту баранів із штамів Brucella abortus та Brucella ovis. - Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук за спеціальностю 16.00.03 - ветеринарна мікробіологія та вірусологія, Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини УААН, Харків, 2004.
Дисертація присвячена виготовленню та дослідженню нешкідливості, антигенності та імуногенності інактивованих емульсин-вакцин проти інфекційного епідидиміту баранів із штамів Brucella abortus та Brucella ovis, визначенню поствакцинальної і постінфекційної гуморальної та клітинної імунної відповіді. Встановлено, що вітчизняні вакцинні штами B. abortus 7-26 і B. ovis 67/Б при збереженні шляхом пересівів на щільних живильних середовищах з інтервалом 30-45 діб або в ліофілізованному стані протягом 10 років стабільні по культурально-морфологічним, антигенним та імуногенним властивостям. З метою оптимізації процесу одержання інактивованої емульсин-вакцини селекційовані клони B. ovis 67/Б-1 і B. ovis 67/Б-2, адаптовані до культивування на МППГГА без сироватки крові тварин та збільшеної концен-трації СО2. Виготовлено і досліджено 17 мікросерій вакцини проти ІЕ баранів.
Показано, що кон’юнктивальний спосіб аплікації живої вакцини з штаму B. abortus 7-26 в дозі 5,0х107 м. к. створював імунітет у 100 % морських свинок в порівнянні з підшкірним введенням вакцини в дозі 25,0х107 м. к. (83,3-100 %) з нетривалим виявленням антитіл до бруцельознього та бруцелаовісного антигенів. Інактивована емульсин-вакцина з цього штаму захищала всіх морських свинок, щеплених підшкірно в дозі 25,0х106 м. к., при контрольному зараженні культурою B. оvis. В дослідах на баранах вакцина в дозі 5,0х109 м. к. була слабореактогенною і високоімуногенною (захист 100 % тварин), викли-кала високий рівень антитіл до бруцельозного та бруцелаовісного антигенів і реакцій клітинного імунітету: позитивна внутришкірна або пальпебральна проби на гіперчутливість уповільненого типу, реакція специфічного лізису лейкоцитів крові in vitro з бруцеліном (20,34±3,56 %) та бруцелоовіном (11,05±2,63 %) та активізацію фагоцитарної системи (ОФР – 95,21±0,09%).
В комісійних дослідах випробувана інактивована емульсин-вакцина проти інфекційного епідидиміту баранів із штаму B. ovis 67/Б та його клонів 67/Б-1, 67/Б-2 на основі масляних ад’ювантів російського і французського (Montanide ISA 70) виробництва. В дослідах на морських свинках, щеплених в дозі 2,5х109 м. к., та в дослідах на баранах, щеплених в дозі 5,0х109 м. к., встановлено імунітет у 100 % тварин, який зберігався у щеплених баранів впродовж 12 місяців (строк спостереження). Поствакцинальна бруцелаовісна серопозитивність проявлалася у всіх щеплених тварин при відсутності бруцельозної серопозитивності.
1. Вивчена стабільність культурально-морфологічних, антигенних та імуногенних властивостей вітчизняних вакцинних штамів B. abortus 7-26 і B. ovis 67/Б, розроблені параметри режиму інактивації суспензій B. abortus і B. ovis, встановлено оптимальну концентрацію мікробних клітин та ад’ювантів в вакцинних препаратах, визначено динаміку гуморальної та клітинної специфічної імунної відповіді, встановлено ступінь імуногенності інактивованих емульсин-вакцин в дослідах на морських свинках і баранах, розроблено лабораторний регламент на виготовлення і контроль інактивованої емульсин-вакцини проти інфекційного епідидиміту баранів та настанову по її застосуванню.
2. Вакцинні штами B. abortus 7-26 і B. ovis 67/Б при збереженні шляхом пересівів на щільних живильних середовищах з інтервалом 30-45 діб або в ліофілізованному стані протягом 10 років стабільні по культурально-морфологічним, антигенним та імуногенним властивостям.
3. З метою оптимізації процесу одержання інактивованої емульсин-вакцини проти інфекційного епідидиміту баранів селекційовані клони B. ovis 67/Б-1 і B. ovis 67/Б-2, що стабільно зберігають антигенні та імуногенні властивості вихідного штаму B. ovis 67/Б, але відрізняються накопиченням та більш легким змивом бактеріальної маси при вирощуванні на щільних живильних середовищах без сироватки крові тварин і без підвищенного вмісту СО2 в атмосфері культивування.
4. Бактеріальні суспензії 2-3-х добових культур B. abortus 7-26, B. ovis 67/Б та клонів B. ovis 67/Б-1, 67/Б-2 при концентрації 5,0х109 або 10,0х109 м. к./ см3 у 0,85 % розчині натрію хлориду, рН 7,2 інактивуються розчином формаліну в кінцевій концентрації 0,4 % впродовж 24 годин при 37,5±0,5О С і наступним витримуванням суспензії при 6,0±2,0О С протягом доби.
5. Кон’юнктивальний спосіб аплікації живої вакцини з штаму B. abortus 7-26 в дозі 5,0х107 м. к. створював імунітет у 100 % морських свинок після контрольного зараження штамом B. ovis 65939 в дозі 2,0х109 м. к. в порівнянні з підшкірним щепленням в дозі 25,0х107 м. к., що індукувало імунітет у 83,3-100,0 % тварин. Інактивована емульсин-вакцина з штаму B. abortus 7-26 створювала імунітет у 100 % щеплених морських свинок в дозі 25,0х106 м. к. У контрольних морських свинок заражаючий штам реізольовано у 83,3-100 % тварин, індекс інфікованності – 21,4-28,6 %.
Після щеплення живою вакциною з штаму B. abortus 7-26, бруцельозну та бруцелаовісну серопозитівність виявили в поодиноких випадках через 45 діб, у той час як застосування інактивованої емульсин-вакцини викликало високий рівень гуморальних антитіл у всіх вакцинованих морських свинок як з бруцельозним (РА – 2,70±0,11 lg, РЗК – 2,64±0,11 lg), так і з бруцелаовісним (РТЗК – 2,45±0,11 lg, РІД – 1,83±0,32 lоg2) антигенами.
6. Інактивована емульсин-вакцина з штаму B. abortus 7-26 в дозі 5,0х109 м. к. була слабореактогенною і високоімуногенною в дослідах на 67 баранах, викликала високий рівень антитіл в реакціях з бруцельозним (РБП – 4,50±0,33 lоg2, РА – 2,83±0,09 lg, РЗК – 3,10±0 lg) та з бруцелаовісним (РТЗК – 2,35±0,10 lg, РА – 2,83±0,08 lg, РІД – 5,50±0,33 lоg2) антигенами і реакцій клітинного імунітету: позитивна внутришкірна або пальпебральна проби на гіперчутливість уповільненого типу, реакція специфічного лізису лейкоцитів крові in vitro з бруцеліном (20,34±3,56 %) та бруцелоовіном (11,05±2,63 %) та активізацію фагоцитарної системи (ОФР – 95,21±0,09%).
Через 6 місяців після однократного застосування вакцини імунітет виявили у 100 % щеплених баранів при виділенні заражаючого штаму B. ovis у 88,9-100 % контрольних тварин, індекс інфікованності – 11,2-50,0 %.
7. Розроблена та випробувана в комісійних дослідах інактивована емульсин-вакцина проти інфекційного епідидиміту баранів із штаму B. ovis 67/Б та його клонів 67/Б-1, 67/Б-2 на основі масляних ад’ювантів російського і французського (Montanide ISA 70) виробництва. В дослідах на 75 морських свинках, щеплених в дозі 2,5х109 м. к., через 30-60 діб після вакцинації встановлен імунітет у 100 % тварин і в дослідах на 26 баранах, щеплених в дозі 5,0х109 м. к., через 6 і 12 місяців після щеплення виявили імунітет у 100 % тварин. Поствакцинальна бруцелаовісна серопозитивність проявлалася у всіх щеплених тварин при відсутності бруцельозної серопозитивності.
8. Розроблено лабораторний регламент на виготовлення і контроль інактивованої емульсин-вакцини з штаму B. ovis 67/Б-1 на стерильність, нешкідливість та імуногенність. Вакцину вводять підшкірно морським свинкам в дозі 0,5 см3 (2,5х109 м. к.) і баранам – в дозі 1,0 см3 (5,0х109 м. к.). Оцінка імуногенності серій вакцини: при експериментальному зараженні вакцина повинна створювати імунітет не менш як 80 % у вакцинованих тварин та інфікуванні тварин в контролі не менш 80 %.
9. Інактивована емульсин-вакцина на основі вітчизняного вакцинного штаму B. ovis 67/Б, клонів 67/Б-1 та 67/Б-2, з масляним ад’ювантом – нешкідливий, екологічно безпечний та імуногенний препарат. Застосування вакцини рекомендується на період оздоровлення вівцеферм, неблагополучних щодо інфекційного епідидиміту баранів.
Публікації автора:
1. Орлов С.М. Клiтиннi реакцiї iмунiтету при iнфекцiйному епiдидимiтi у баранiв, щеплених вакцинами з штаму Бр. абортус 7-26 // Пробл. вет. медицини по обслуговуванню тваринництва колектив. та фермер. господарств: Матерiали/ Конф. молодих вчених i спецiалiстiв України, 26 жовт. 1992 р., Харків.– Х., 1992.– C.38-39.
2. Бабкiн А.Ф., Дейнеш А.А., Орлов С.М. Застосування РIД для дiагностики iнфекцiйного епiдидимiту баранiв // Вет. медицина: Мiжвiд. тематич. наук. зб.– К., 1993.– Вип. 68.– С.66-70. (Дисертантом досліджено вірулентні властивості культури B. ovis 65939 при контрольному зараженні баранів шляхом аплікації на слизову оболонку очей та препуція).
3. Орлов С.Н. Сравнительное изучение иммунного ответа на введение живой и инактивированной эмульсин-вакцины из штамма БР. АБОРТУС 7-26 против инфекционного эпидидимита баранов // Общая эпизоотология: иммунол., экол. и методол. проблемы: Материалы междунар. науч. конф., 20-22 сент. 1995 г. / ИЭКВМ.– Х., 1995.– С.312-314.
4. Бабкин А.Ф., Галищев Н.И., Орлов С.Н. Изучение инактивированной эмульсин-вакцины из различных видов бруцелл против инфекционного эпидидимита в опытах на баранах // Общая эпизоотология: иммунол., экол. и методол. проблемы: Материалы междунар. науч. конф., 20-22 сент. 1995 г. / ИЭКВМ.– Х., 1995.– С.446-448. (Дисертант вивчив імунізуючі дози інактиво-ваної емульсин-вакцини з штаму B. abortus 7-26, та приймав участь в дослідженні антигенних та імуногенних властивостей емульсин-вакцини з штаму B. ovis 67/Б проти інфекційного епідидиміту).
5. Орлов С.М. Iмуногеннiсть живої та iнактивованої вакцин з штаму B. abortus
7-26 на морських свинках при бруцелаовiснiй iнфекцiї // Вет. медицина: Мiжвiд. темат. наук. зб.– Х., 2000.– Вип. 78, Т. 1.– С.228-231.
6. Бабкин А.Ф., Орлов С.Н. Влияние адьювантов на иммуногенность инактиви-рованной бруцеллаовисной вакцины // Пробл. зооiнженерiї та вет. медицини: Зб. наук. праць / ХЗВI: Матерiали 5-го з`їзду паразитоценологiв України 5-6 квiтня 2001 р.– Х., 2001.– С.172-173. (Дисертантом вивчено в порівняльних дослідах на морських свинках імунну відповідь і протективні властивості інак-тивованих вакцин з штаму B. ovis 67Б та селекційованих клонів B. ovis 67/Б-1, 67/Б-2 проти бруцелаовісної інфекції з застосуванням різних ад’ювантів).
7. Бабкин А.Ф., Орлов С.М. Експериментальне дослідження інактивованої емульсин-вакцини з ад’ювантом Montanide ISA-70 проти бруцелаовісної інфекції // Вет. медицина: Міжвід. темат. наук. зб.– Х., 2002.– Вип. 80: 80 років ІЕКВМ.– С.47-50. (Дисертантом в досліді на морських свинках вивчено нешкідливість, антигенність та імуногенність двох серій емульсин-вакцини з штаму B. ovis 67/Б-1).
8. Орлов С.Н. Сравнительная оценка иммуногенных свойств вакцин из штамма B. abortus 7-26 против бруцеллаовисной инфекции // Вет. медицина: Мiжвiд. темат. наук. зб.– Х., 2003.– Вип. 81. – С.222-227.
9. Бабкин А.Ф., Орлов С.Н. Гиперчувствительность лейкоцитов крови баранов после введения убитых и живых культур B. abortus штамм 7-26 и B. ovis штамм 8406 // Вет. медицина: Мiжвiд. темат. наук. зб.– Х., 2003.– Вип. 82. – С.67-71. (Дисертантом досліджено стан гіперчутливості лейкоцитів крові баранів в реакції специфічного лейколізису з бруцеліном і бруцелоовіном після інокуляції інактивованої та живої культур B. abortus та B. ovis).
10. Бабкин А.Ф., Орлов С.Н. Результаты комиссионнго испытания эмульсин-вакцины из штамма B. ovis 67/Б-1 против бруцеллаовисной инфекции // Вет. медицина: Мiжвiд. темат. наук. зб.– Х., 2003.– Вип. 82. – С.72-75. (Дисертантом проведено серологічні та бактеріологічні дослідження у баранів при випробуванні емульсин-вакцини з штаму B. ovis 67/Б-1).
11. Бабкин А.Ф., Орлов С.Н. Результаты изучения инактивированной эмульсин-вакцины из штамма B. ovis 67/Б против инфекционного эпидидимита баранов // Вет. медицина: Мiжвiд. темат. наук. зб.– Х., 2004.– Вип. 84. – С.58-64. (Дисертантом досліджено антигенні та імуногенні властивості 5 експери-ментальних серій інактивованої емульсин-вакцини з штаму B. ovis 67/Б та селекційованих клонів B. ovis 67/Б-1, 67/Б-2 в дослідах на морських свинках та баранах).
12. Пат. 51379 А UA, MKI 7 А61К39/10. Штам Brucella ovis 67/Б для виготовлення інактивованої емульсин-вакцини проти інфекційного епідидиміту баранів: Пат. 51379 А UA, MKI 7 А61К39/10/ А.Ф. Бабкін, С.М. Орлов, М.Г. Галіщев; Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини. – № 2002031887; Заявл. 07.03.2002; Опубл. 15.11.2002; Бюл. № 11.
13. Пат. 53940 А UA, MKI 7 А61К39/10. Інактивована емульсин-вакцина з штаму Brucella ovis 67/Б проти інфекційного епідидиміту баранів: Пат. 53940 А UA, MKI 7 А61К39/10/ А.Ф. Бабкін, С.М. Орлов, М.Г. Галіщев; Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини. – № 2002032280; Заявл. 22.03.2002; Опубл. 17.02.2003; Бюл. № 2.
14. Орлов С.Н., Бабкин А.Ф. Лабораторные опыты по изучению живой и инактивированной вакцин из штамма Б. абортус 7-26 при инфекционном эпидидимите // Повышение продуктивности с.-х. животных и совершен-ствование мер борьбы с болезнями в условиях интенсивного ведения животноводства и создания фермер. хозяйств: Тез. докл. / Всесоюз. науч. конф., 17-22 сент. 1991 г., посвящ. 140-летию ХЗВИ.– Х., 1991.– С.135. (Дисертантом вивчено гуморальну імунну відповідь у морських свинок після щеплення живої та інактивованої вакцин з штаму B. abortus 7-26 і протективні властивості після зараження культурою B. ovis).
