Геращенко Ганна Володимирівна. Функціональні характеристики органної культури надниркових залоз при кріоконсервуванні та ксенотрансплантації : Дис... канд. наук: 03.00.19 - 2002.
Анотація до роботи:
Геращенко Г.В. Функціональні характеристики органної культури надниркових залоз при кріоконсервуванні та ксенотрансплантації. - Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.19 - кріобіологія, Інститут проблем кріобіології і кріомедицины НАН України, Харків, 2002.
У роботі досліджувались функціональні характеристики органної культури надниркової залози новонароджених поросят при її кріконсервуванні, тривалому зберіганні (-196С) і ксенотрансплантації адреналектомованим щурам в залежності від її вихідних параметрів – введення стимуляторів або інгібіторів секреції на етапах культивування, після відігріву і перед трансплантацією. Кріоконсервований матеріал зберігає незалежно від строків його зберігання (1-360 днів) здатність до стероїдогенезу, базальної та стимульованої секреції і рекультивування.
Кріоконсервований ксенотрансплантат виявляє компенсаторний ефект на гормональний статус тварин (підвищення рівня гормонів у крові), величина якого залежить від його вихідних параметрів. Гістологічні та біохімічні дослідження свідчать про роботу ксенотрансплантату на 30-у - 45-у добу після трансплантації.
1. Широке впровадження методу ксенотрансплантації органних культур надниркової залози новонародженого поросяти є можливим на основі створення запасів кріоконсервованого матеріалу. Низькотемпературне зберігання протягом 1-го року органної культури надниркової залози, замороженої за двоетапною програмою незалежно від термінів зберігання в цей період забезпечує, за даними гістологічних досліджень, збереження морфологічної структури і функціональних характеристик - стероїдогенезу екзогенного холестерину, базальної і стимульованої секреції глюкокортикоїдів, а також здатність до рекультивування після відігрівання.
2. Екстрактивність з біологічного матеріалу глюкокортикоїдів і відтворюваність флуориметричного методу їхнього визначення залежать від температури, концентрації гормонів і часу контакту останніх з реагентами. Підвищення температури до 37С, концентрація гормонів шляхом вакуумного випарювання і використання термостатування забезпечує розвиток максимальної флуоресценції за 6 хв у порівнянні з 1,5 годинами за стандартною методикою, що дозволяє скоротити втрату гормонів на 20% і поліпшити відтворюваність існуючого методу.
3. Уведення стимулятора стероїдогенезу АКТГ у різний термін культивування знижує кріостійкість ендокринного матеріалу, що відбивається у зниженні базальної та стимульованої секреції глюкокортикоїдів. Найбільш стійкою до низькотемпературного збереження є культура, вирощена за відсутності АКТГ. Додавання стимулятора стероїдогенезу на 4-у добу культивування сприяє досягненню максимуму секретуючої активності, характерної для 5-ої доби культивування за відсутності стимулятора.
4. Ксенотрансплантація кріоконсервованої органної культури новонароджених поросят адреналектомованим тваринам незалежно від умов підготовки розмороженого матеріалу до трансплантації сприяє нормалізації гормонального статусу експериментальних тварин. Рівень 11-ОКС у крові досягає 77-85 % рівня контрольних тварин у порівнянні з 25 % в адреналектомованих тварин до ксенотрансплантації. В усіх випадках до 30-ої – 45-ої доби після підсадження в гістологічних препаратах трансплантатів реєструвалася наявність життєздатних секреторних клітин культури.
5. Компенсаторна функція кріоконсервованої органної культури надниркової залози в організмі адреналектомованих тварин визначається умовами підготовки матеріалу для трансплантації. До 30-ої доби після трансплантації більшу компенсаторну функцію мають культури, трансплантовані після відігрівання. Однак, до 45-ої доби максимальний рівень 11-ОКС у крові адреналектомованих тварин відзначений у випадку підсадження матеріалу, у якому був інгібований хлоридом кадмію стимульований шлях секреції. Проміжний ефект був отриманий при трансплантації рекультивованої кріоконсервованої органної культури, обробленої стимулятором стероїдогенезу перед трансплантацією.
6. Трансплантати, виділені з організму адреналектомованих щурів до 45-ої доби, зберігають секретуючі клітини, у яких рівень 11-ОКС складає 0.037±0.002 мкг/мг тканини. Функціональна активність трансплантата визначає компенсаторну функцію сім’яників по виробленню глюкокортикоїдів: чим вище функціональна активність трансплантату, тим є нижчою компенсаторна функція сім’яників.
Публікації автора:
Бондаренко Т.П., Геращенко А.В., Кирюшина И.И. Влияние димексида и экстрактов гипофиза на гормональную активность клеток культуры коры надпочечников новорожденных поросят // Проблемы криобиологии.- 1998.- №3.- С.55-57.
Бондаренко Т.П., Геращенко А.В. Функциональные характеристики органной культуры надпочечников новорожденных поросят после криоконсервирования // Проблемы криобиологии.-2001.-№2.- С.108-109.
Бондаренко Т.П., Геращенко А.В., Божок Г.А., Алабедалькарим Н.М. Оптимизация условий экстрагирования и развития флуоресценции при определении глюкокортикоидов в биологических жидкостях // Лабораторная диагностика.- 2001.- №3.- С. 36-39.
Заготівля, кріоконсервування та клінічне застосування органної культури наднирників новонароджених поросят в лікуванні недостатності наднирників: Методичні рекомендації / Грищенко В.І., Бондаренко Т.П., Божок Г.А., Легач Є.І., Алабедалькарім Н.М., Геращенко А.В., Самченко І.І.- Харків.-2000.-14с.
Бондаренко Т.П., Геращенко А.В., Алабедалькарим Н.М., Божок Г.А. Влияние экстрактов гипофиза на содержание белка и 11-ОКС при культивировании органной культуры надпочечников новорожденных поросят // Труды научной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения акад. И.Н.Буланкина 16-17 января 2001 г.- Харьков.- 2001.- С.22-23.
Легач Е.И., Геращенко А.В., Самченко И.И. Ксенотрансплантация криоконсервированной культуры адренокортикоцитов как альтернатива гормонотерапии // Збірник тез конференції молодих вчених ХДМУ: Медицина третього тисячоліття.- Харьков.- 2001.- Ч.1.- С.22.
Бондаренко Т.П., Алабедалькарим Н.М., Божок Г.А., Геращенко А.В., Самченко И.И., Легач Е.И. Исследование стероидогенной активности криоконсервированной органной культуры надпочечников при ксенотрансплантации // Проблемы криобиологии.- 2001.-№3.- С.36.
Bondarenko T.P., Legach E.I., Kiryushina I.I., Gerschenko A.V. Cryopreservation Effect on Adrenocortical Tissue of New Born Piglets // Proc. of 35-th Annual Meeting of the Society for Cryobiology: Pittsburgh., Pensylvania, USA.- 1998.- P.132.
