Анотація до роботи:

Лісовський І.Л. Експресія генів дефенсинів в клітинах злоякісних пухлин людини. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 14.01.07 – онкологія. – Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України, Київ, 2002.

Дисертацію присвячено вивченню конститутивної експресії генів дефенсинів в клітинах злоякісних пухлин людини різного гістогенезу, умов індукції експресії гена hBD-2 в клітинах ліній А431 та М-HeLa та впливу таких умов на функціональний стан ЕФР-рецептору.

В експериментальних дослідженнях встановлено, що злоякісно трансформовані клітини різного гістогенезу характеризуються певним спектром конститутивної експресії генів дефенсинів. Встановлено, що в пухлинних клітинах епітеліального походження експресія гена hBD-2 індукується у відповідь на бактеріальну інфекцію та дію ЕФР/ТФР-a, але не індукується у відповідь на вірусну інфекцію. Показано, що внаслідок пролонгованого впливу бактеріальної інфекції та факторів росту активується один і той же внутрішньоклітинний сигнальний каскад, результатом чого є індукція експресії гена hBD-2. Виявлено, що за умов довготривалої дії на клітини лінії А431 як факторів росту, так і бактеріальних агентів, фосфокіназна активність ЕФР-рецептору помітно знижується. Можливим чинником цього ефекту може бути активована продукція hBD-2.

Встановлено, що в пухлинному епітелії вульви та шийки матки, на відміну від нормального епітелію, гіперекспресовано ген hBD-1 та активовано транскрипцію гена hBD-2, яка асоційована з гіперекспресією ЕФР-рецептору.

1. Встановлено, що культивовані пухлинні клітини епітеліального походження КВ, M-HeLa, А431та сублінія А431/1522 конститутивно експресують ген HD-6, а лінії КВ, А431та сублінія А431/1522 також і ген hBD-1; Т-лімфоїдні пухлинні клітини CCRF-CEM та Molt-4 експресують ген HD-6, а клітинна лінія гліобластоми U251 – гени HNP-1 та HNP-3.

2. Показано, що експресія гена hBD-2 в клітинах ліній M-HeLa та А431 індукується не лише внаслідок дії бактеріальних агентів, а й внаслідок дії на клітини факторів росту, а рівень експресії генів HD-6 та hBD-1 при дії вказаних чинників залишається незмінним.

3. Продемонстровано, що експресія гена hBD-2 в клітинах ліній А431 та M-HeLa не індукується у відповідь на аденовірусну інфекцію in vitro.

4. Встановлено, що інкубація клітин лінії А431 не лише з факторами росту, але й з бактеріальними агентами (B.subtilis, ЛПС) призводить до підвищення фосфокіназної активності рецептора ЕФР, що в свою чергу призводить до транскрипції гена hBD-2, а спільною ланкою цих процесів є накопичення інтермедіата з молекулярною масою 38-40 кД, фосфорильованого за тирозином.

5. Визначено, що індукція транскрипції гена hBD-2 призводить до зменшення проліферативного потенціалу злоякісно трансформованих клітин, за рахунок зниження фосфокіназної активності ЕФР-р.

6. Показано, що клітини пухлин вульви та шийки матки людини характеризуються в більшості випадків підвищеним рівнем експресії гена hBD-1 та наявністю експресії гена hBD-2, яка асоційована з гіперекспресією ЕФР-Р.

Публікації автора:

1. Лісовський І.Л., Хобта А.І., Солдаткіна М.А., Литвин Д.І., Маркеєва Н.В., Сидорик Л.Л., Погрібний П.В. Експресія гена дефенсину-6 (HD-6) у лініях пухлинних клітин людини// Биополимеры и клетка.- 2000.- Т.16, №6.- С.525-529. (Самостійно проводив виділення РНК та постановку реакції зворотньої транскрипції).

2. I.L. Lisovskiy, M.A. Soldatkina, D.I. Lytvyn, N.V. Markeeva, O.V. Turchak, S.V. Nespryad’ko, A.B. Vinnitskaya, P.V. Pogrebnoy. Expression of defensin genes in A431 and M-HeLa cell lines and in tumors of human vulval and cervical carcinoma// Эксперим. онкол.-2001.- Т.23, №2.- С. 119-122. (Самостійно провів дослідження спектру експресії генів дефенсинів методом ЗТ-ПЛР).

3. Hobta A.I., Lisovskiy I.L., Mikhalup S.V., Kolybo D.V., Romaniouk S.I., Soldatkina M.O., Markeeva N.V., Garmanchouk L.V., Sydorenko S.P., Pogrebnoy P.V. Epidermoid carcinoma derived antimicrobial peptide (ECAP) inhibits phosphorylation by protein kinases in vitro// Cell Biochem. Func.- 2001.- Vol. 19, №4.- P. 291-299. (Самостійно проводив аналіз бактерицидної активності препаратів культурального середовища клітин А431).

4. I.L. Lisovskiy, M.A. Soldatkina, D.I. Lytvyn, N.V. Markeeva, O.V. Turchak, S.V. Nespryad’ko, A.B. Vinnitskaya, L.N. Nosach, O.U. Povnitsa, P.V. Pogrebnoy. Pattern of expression of b-defensin-2 (hBD-2) and EGFR mRNA in malignant cells of human cervix and vulvae// Эксперим. онкол.-2001.- Т.23, №4.- С. 248-252. (Самостійно проводив визначення експресії гена hBD-2 методом ЗТ-ПЛР).

5. Лісовський І.Л., Солдаткіна М.О., Погрібний П.В. Експресія генів дефенсинів в пухлинах генітальної системи людини / Матеріали 10 з’їзду онкологів України, Крим, 10-12 жовтня, 2001.- С. 45.

6. Lisovskiy I.L., Hobta A.I., Soldatkina M.I., Pogrebnoy P.V. Detection of expression of beta defensin gene in human tumor cells / “Онкология 2000”: Тезисы II съезда онкологов стран СНГ, Украина, Киев, 23-26 мая, 2000.// Exp. Oncol.- Vol. 22 (Suppl.).- №145.

7. Lisovskiy I., Hobta A., Soldatkina M., Garmanchouk L., Markeeva N., Lytvyn D., Pogribnyi P. Detection of mRNA for beta-defensin 2 in human cell lines of epithelial origin / 18^th International Congress of Biochemistry and Molecular Biology, UK, Birmingham, 16-20 July, 2000.- № 525.

8. Lisovskiy I.L., Soldatkina M.A., Lytvyn D.I., Markeeva N.V., Nosach L.N., Povnitsa O.U., Pogrebnoi P.V. Expression pattern of defensin genes in cervical and vulval cancer cells / International Symposium Intracellular Signalling in Plant and Animal Systems, Ukraine, Kyiv, 9-14 September, 2001.- P. 76.

9. Лісовський І.Л., Солдаткіна М.О., Литвин Д.І., Шніцар В.М., Маркеєва Н.В., Сєров С.М., Погрібний П.В. Гіперекспресія трансформуючого фактору росту a та механізми контролю росту клітин лінії А431/1522 / “Шляхи та перспективи розвитку експериментальної онкології в Україні” під. ред. Чехуна В.Ф.// “Діа”, Київ, 2001.- С. 70-77.