Небещук Олександр Дмитрович. Експериментальне обґрунтування імуноферментної діагностики трихінельозу тварин : Дис... канд. наук: 16.00.11 - 2008.
Анотація до роботи:
Небещук О.Д. Експериментальне обґрунтування імуноферментної діагностики трихінельозу тварин. – Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук за спеціальністю 16.00.11 – паразитологія, гельмінтологія. – Національний аграрний університет, Київ, 2008.
У дисертації викладено дані експериментального зараження личинками Trichinella spiralis свиней, собак та коней. Визначено інтенсивність інвазії окремих груп м’язів у експериментально заражених тварин. Встановлено, що у коней інтенсивність інвазії масетерів та м’язів язика вища, ніж м’язів діафрагми. Вивчено динаміку утворення антитіл у тварин за експериментальної інвазії. Діагностичні титри антитіл (IgG) за допомогою ІФА виявлено в сироватці крові тварин на 2–4-й тижні після зараження.
Вперше розроблено та впроваджено у практику ветеринарної медицини тест-систему діагностичну імуноферментну „Trichineliso test AB“ для виявлення антитіл до Trichinella spiralis у сироватці крові свиней, коней і м’ясоїдних тварин. Розроблено модифікацію тест-системи „Trichineliso test AB“ на основі дот-ІФА, яка дозволяє проводити діагностику трихінельозу без використання спеціального обладнання.
Проведено моніторингові дослідження на трихінельоз в Україні у 2006 р. Трихінельозну інвазію виявлено у 0,003% свиней, 2,17 – лисиць та 46,15 % вовків. Запропоновано фахівцям ветеринарної медицини науково обґрунтовані заходи боротьби та профілактики трихінельозу.
1. У дисертації теоретично і експериментально обґрунтовані методи імуноферментної діагностики трихінельозу тварин (свиней, коней, м’ясоїдних) та розроблено і впроваджено у практику ветеринарної медицини тест-системи на основі ІФА, дот-ІФА та ТУ до них, що є новим і перспективним вирішенням проблеми діагностики трихінельозу в Україні.
2. Доведено, що високоспецифічним антигеном при імуноферментній діагностиці трихінельозу тварин є екскреторно-секреторний (порівнянно з соматичним), виготовлений шляхом культивування личинок Trichinella spiralisin vitro на модифікованому живильному середовищі DMEM. Основним компонентом екскреторно-секреторного антигену є протеїн з молекулярною масою 43 kDa.
4. Встановлено, що кращим імуноферментним кон’югатом для виготовлення тест-системи, який специфічний для імуноглобулінів класу G свиней, коней та м’ясоїдних, є рекомбінантний білок G Streptococcus spp., кон’югований з пероксидазою хрону.
5. У процесі експериментального відтворення трихінельозної інвазії у тварин, в тому числі коней, специфічні антитіла (Ig G) з’являються у крові на 14–28-у добу після зараження, максимальні їх титри (1:400–1:800) спостерігаються на 21–28-у добу, що дозволяє встановити діагноз за допомогою ІФА на 3–4-й тижні після зараження тварин.
6. Розроблена тест-система „Trichineliso test AB“ за чутливістю та специфічністю не поступається тест-системам виробництва Російської Федерації (ВІГІС, ЗАО „Вектор-бест“) і Німеччини (Федеральний інститут охорони здоров’я та ветеринарної медицини, Берлін) і становить 100%.
7. Розроблена модифікація стандартної тест-системи „Trichineliso test AB“ на основі дот-ІФА дає змогу проводити і оцінювати реакцію візуально без використання спеціального обладнання (автоматичного промивача, автоматичного спектрофотометра, термостата). Чутливість та специфічність її не поступається стандартній тест-системі.
8. Результати моніторингових досліджень на трихінельоз, проведених в Україні у 2006 р. з використанням розробленої тест-системи, свідчать про поширення трихінельозу серед свійських (свиней – 0,003%) і диких (лисиць – 2,17, вовків – 46,15%) тварин.
Публікації автора:
Методичні рекомендації
Методичні рекомендації з діагностики трихінельозу тварин / В.М. Горжеєв, О.М. Вержиховський, Р.М. Чумак, Ю.Г. Артеменко, Л.П. Артеменко, О.Д. Небещук, Д.Л. Мартиненко, А.В. Абрамов, О.П. Литвиненко. – К, 2006. – 31 с. (Дисертант брав участь у аналізі літературних джерел, підготовці розділу „Методи прижиттєвої діагностики трихінельозу“, графічному забезпеченні методичних рекомендацій).
Трихінельоз тварин та сучасна діагностика тканевих гельмінтозів: Методичні рекомендації для фахівців ветеринарної медицини, слухачів інституту післядипломного навчання, керівників та спеціалістів ветеринарної медицини і студентів факультетів ветеринарної медицини / Ю.Г. Артеменко, Л.П. Артеменко, С.І. Пономар, О.Д. Небещук, А.В. Абрамов, О.П. Литвиненко. – Біла Церква, 2007. – 77 с. (Дисертант брав участь у аналізі літературних джерел, графічному забезпеченні рекомендацій, підготував розділ, присвячений діагностиці трихінельозу).
Артеменко Ю.Г., Небещук О.Д. Діагностика трихінельозу в коней // Вет. медицина України. – 2006. – № 5. – С. 14 – 15. (Дисертант брав участь у розробці діагностичної тест-системи, проводив відбір сироваток крові, досліджував їх в ІФА, брав участь в обробці та аналізі одержаних результатів, підготував матеріали до друку).
Артеменко Ю.Г., Небещук А.Д. Экспериментальный трихинеллёз лошадей // Труды Всерос. ин-та гельминтол. им. К.И. Скрябина. – М., 2006. – Т. 43. – С. 9 – 14. (Дисертант проводив експериментальне зараження тварин, відбирав зразки крові та м’язів, проводив дослідження сироватки крові в ІФА, підраховував кількість личинок трихінел у різних групах м’язів, обробив та узагальнив одержані результати, підготував роботу до друку).
Артеменко Ю.Г., Артеменко Л.П., Небещук О.Д. Основні напрями боротьби з трихінельозом в Україні на сучасному етапі // Вісник Білоцерків. держ. аграр. ун-ту: Зб. наук. праць. – Біла Церква, 2006. – Вип. 39. – С. 51 – 56. (Дисертант брав участь у розробці імуноферментної тест-системи для діагностики трихінельозу тварин, підготував матеріали до друку).
Моніторингові дослідження на трихінельоз в Україні / Ю.Г. Артеменко, Л.П. Артеменко, О.Д. Небещук, О.П. Литвиненко // Вет. медицина. – Харків, 2007. – Вип. 88. – С. 156 – 158. (Дисертант брав участь у розробці програми моніторингових досліджень на трихінельоз в Україні, у обробці та аналізі одержаних результатів, підготував матеріали до друку).
Отримання стандартних сироваток для тест-систем ІФА при трихінельозній інвазії / А.М. Головко, Я.А. Древаль, Ю.Г. Артеменко, Л.П. Артеменко, О.Д. Небещук, Д.Ю. Рибальченко, Д.М. Король // Вісник Білоцерків. держ. аграр. ун-ту: Зб. наук. праць. – Біла Церква, 2004. – Вип. 29. – С. 64 – 70. (Дисертант проводив експериментальне зараження тварин, відбирав зразки сироваток крові, досліджував в ІФА, брав участь у обробці та аналізі одержаних результатів).
Нормативні документи
Інструкція з діагностики, профілактики та ліквідації трихінельозу тварин / В.М. Горжеєв, А.В. Абрамов, Ю.Г. Артеменко, Л.П. Артеменко, О.П. Литвиненко, О.Д. Небещук. – К., 2007. (Дисертант брав участь у підготовці розділу інструкції „Діагностика“).
Програма моніторингових досліджень на трихінельоз в Україні на 2005–2006 роки / В.М. Горжеєв, А.В. Абрамов, Л.П. Артеменко, О.П. Литвиненко, О.Д. Небещук. – К., 2005. (Дисертант брав участь у розробці програми, для її виконання використана розроблена тест-система).
Розробки
Тест-система діагностична імуноферментна „Trichineliso test AB“. Технічні умови / Л.П. Артеменко, В.Г. Скибіцький, Р.М. Чумак, С.Д. Мельничук, М.Д. Мельничук, Д.Л. Мартиненко, Л.В. Ніколайчук, Д.Ю. Рибальченко, В.Г. Спірідонов, Д.М. Король, О.Д. Небещук. – К., 2005. (Дисертант брав участь у розробці, випробуванні та впровадженні у практику тест-системи).
Набір діагностичний для ідентифікації личинок Trichinella spiralis методом перетравлення проб м’язів. Технічні умови / Ю.Г. Артеменко, Л.П. Артеменко, Д.Ю. Рибальченко, О.Д. Небещук, О.П. Литвиненко, Д.М. Король. – К., 2005. (Дисертант брав участь у розробці, випробуванні та впровадженні у практику набору).
