Анотація до роботи:

Нестерова Л. Ю. Біологічні та імуногенні властивості епізоотичних штамів вірусу інфекційного бронхіту курей. — Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук за спеціальністю 16.00.03 — ветеринарна мікробіологія та вірусологія. Національний науковий центр «Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини», Харків, 2008.

Дисертація присвячена вивченню біологічних, фізико-хімічних, імуногенних властивостей епізоотичних штамів ВІБК, циркулюючих у птахогосподарствах Луганської області. Результати серологічного моніторингу впродовж 2003–2006 рр. вказують на поширення збудника ІБК у промислових птахогосподарствах. З патологічного матеріалу, відібраного від курей і курячих ембріонів, ізольовано 6 штамів ВІБК. За патогенністю для курячих ембріонів, курчат та культури клітин фібробластів курячого ембріону ізоляти ЛІ-1 і ЛІ-2 віднесено до вірулентних. Інфекційна активність ізоляту ЛІ-1 у курячих ембріонах становить 5Ч10^6,26 ЕІД₅₀/см³, ізоляту ЛІ-2 — 5Ч10^7,0 ЕІД₅₀/см³.

Аутентичність патогенних ізолятів ЛІ-1 та ЛІ-2 вірусу ІБК встановлена за ПЛР і характерною для коронавірусів морфологією віріонів (сферична форма, розмір 122–169 нм, оболонка з булавоподібними виступами 10–18 нм).

У культурі клітин Vero ізолят ЛІ-1 нарівні з вакцинним штамом 4/91 ВІБК проявляє цитопатогенну дію за типом симпластоутворення, тоді як репродукція ізоляту ЛІ-2 і штаму Н-120 ВІБК спричиняє деструктивні зміни клітин. Установлено, що ізольовані штами викликають пригнічення мітотичної активності культури клітин Vero зі збільшенням кількості патологічних мітозів, серед яких переважала пола метафаза, що складала 40,48 % (ЛІ-2), 42,58 % (4/91) та 44,6 % (ЛІ-1) від загальної кількості патологічних мітозів. Титр ізолятів ЛІ-1 та ЛІ-2 ВІБК у культурі клітин Vero становить відповідно 10^4,59 і 10^5,25 ТЦД₅₀/см³.

Ізоляти ЛІ-1 і ЛІ-2 викликають гемаглютинацію еритроцитів півня і чутливі до температури 45 С.

Характерною білковою фракцією як для ізольованих, так і для вакцинних штамів 4/91, Н-120 і Ма-5 ВІБК є фракція 25,1 кD, що за молекулярною масою відповідає внутрішньому мембранному білку (М) та матриксному глікопротеїну (Е₁) ВІБК. Білкова фракція молекулярною масою 67,0 кDa встановлена лише в складі польових штамів.

Після інтраназального та інтраокулярного інфікування курчат з різним рівнем пасивного імунітету до ВІБК ізоляти ЛІ-1 і ЛІ-2 індукують появу циліостазу й накопичення антитіл у сироватці крові, між якими встановлено зворотно-пропорційну кореляцію.

1. У дисертації узагальнено результати серологічного моніторингу та вірусологічного дослідження птахопоголів’я з визначенням ефективності профілактики інфекційного бронхіту курей при застосуванні в птахогосподарствах імпортних вірус-вакцин. Проміж вакцинованого птахопоголів’я встановлено циркуляцію епізоотичних штамів вірусу інфекційного бронхіту курей, які за біологічними, фізико-хімічними і імуногенними властивостями мають відмінності від вакцинних штамів вірусу.

2. За серологічним моніторингом птиці, щепленої моно- і бівалентними вакцинами, виготовленими на основі штамів Ма-5, Н-120 та 4/91, встановлено низький рівень сероконверсії в курчат 1–30-добового віку (0–40 %), строкатість та підвищення до 4,0–4,8 log₂ титрів антитіл до вірусу інфекційного бронхіту в птиці починаючи з 200-добового віку, зниження на 15–20 % яєчної продуктивності, появу деформованого яйця (до 5 %) і наявність 25–30 % задохликів серед відходів інкубації.

3. За ідентифікацією 7-ми інфекційних агентів, виділених з патологічного матеріалу від курей 2-х промислових і 3-х індивідуальних птахогосподарств, методом ампліфікації фрагменту кДНК ділянки S₁ гену віднесено до виду Avian Coronavirus (Infectious bronchitis virus).

4. Ізоляти ЛІ-1 та ЛІ-2 є патогенними для курячих ембріонів 9–11-добової інкубації і спричиняють загибель, карликовість, набряк хоріоналантоїсної оболонки, наявність уратів у екстраембріональній рідині. На відміну від вакцинних штамів 4/91 і Н-120 характерною патологоанатомічною зміною ембріонів, заражених ізолятом ЛІ-1, є збільшення об’єму екстраембріональної рідини, а ізолятом ЛІ-2 — гіперемія та крововиливи на тілі ембріонів. Титр інфекційності ізоляту ЛІ-2 становить 5Ч10^6,26 ЕІД₅₀/см³, ізоляту ЛІ-1 — 5Ч10^7,0 ЕІД₅₀/см³.

5. У біопробі на курчатах 3- і 13-добового віку за інтраназальним інфікуванням встановлено, що ізоляти ЛІ, ЛІ-3, ЛІ-4, ЛІ-5 та ЛІ-6 є непатогенними. Ізоляти ЛІ-1 і ЛІ-2 через 12–36 годин після інфікування викликають захворювання в 40 і 100 % курчат відповідно, з індукцією вірусоспецифічних антитіл, що виявляються в сироватці крові в титрах 1:4 і 1:16 на 25-ту (ЛІ-1) та 3-тю доби (ЛІ-2).

6. Ізоляти ЛІ-1 та ЛІ-2 вірусу інфекційного бронхіту курей подібно до вакцинних штамів 4/91 і Н-120 розмножуються в культурі первинно трипсинізованих фібробластів курячого ембріону і перещеплюваних клітин Vero з ознаками симпластоутворення і деструктивних змін. Репродукція вірусу в інфікованих культурах клітин супроводжується пригніченням мітотичної активності зі збільшенням кількості патологічних мітозів до 47,5±0,15–51,25±0,25 % (у нормі 4,25±0,13–7,75±0,13 %). Інфекційність ізоляту ЛІ-1 у культурі клітин Vero становить 10^4,59 ТЦД₅₀/см³, ізоляту ЛІ-2 — 10^5,25 ТЦД₅₀/см³.

7. Ізоляти ЛІ-1 та ЛІ-2 є віріонами сферичної форми діаметром 122–169 нм з булавоподібними виступами довжиною 10–18 нм. Білкова фракція молекулярною масою 25,1 кD, що відповідає внутрішньому мембранному білку (М) та матриксному глікопротеїну (Е₁) вірусу інфекційного бронхіту, є загальною як для ізолятів ЛІ-1 та ЛІ-2, так і для вакцинних штамів 4/91, Н-120, Ма-5, тоді як білкова фракція 67,0 кD виявлена лише в ізолятів.

8. Установлено більш виражену терморезистентність ізолятів ЛІ-2 (5Ч10^6,23 ЕІД₅₀/см³) та ЛІ-1 (5Ч10^5,33 ЕІД₅₀/см³) до температури 45 С впродовж 90 хвилин, під впливом якої титр їх інфекційності знизився відповідно на 4,0 і 4,33 lg ЕІД₅₀/см³, у порівнянні до вакцинного штаму Ма-5, який за цього температурного режиму повністю інактивується.

9. На відміну від вакцинного штаму Н-120 вірусу інфекційного бронхіту курей встановлено лабільність гемаглютинуючих властивостей ізолятів ЛІ-1 та ЛІ-2 впродовж зберігання за температури мінус 20 С і тенденцію до зниження рівня гемаглютининів як без, так і після обробки трипсином.

10. Ізольовані штами ЛІ-1 та ЛІ-2 нарівні з вакцинними штамами Ма-5, Н-120 та 4/91 викликають запальні та деструктивні процеси в організмі курчат: помірний набряк власно слизової оболонки трахеї, збільшення кількості келихоподібних клітин, дециліацію, деструкцію та відшаровування епітеліальних клітин трахеї, гостру венозну гіперемію і лімфоїдну інфільтрацію легень та нирок.

11. Встановлено зворотно-пропорційну кореляцію між циліарною активністю трахеї й титром антитіл до вірусу інфекційного бронхіту в курчат після інокуляції ізоляту ЛІ-2 і штаму Н-120. З підвищенням титру антитіл від 3,75 до 4,5 log₂ подовжується термін (до 3–4 діб) та знижується ступінь прояву циліостазу трахеї від 40,0 до 31,75 і від 19,25 до 10,00 балів відповідно.

Публікації автора:

1. Пархоменко, Л. І. Серологічний контроль деяких інфекційних хвороб птиці в птахогосподарствах Луганської області [Текст] / Л. І. Пархоменко, Л. Ю. Петренко, О. О. Землянська, О. В. Івлєва // Біол. науки : зб. наук. праць Луганського ДАУ. — Луганськ, 2001. — № 13 (25). — С. 143–146. (Дисертанткою проведені серологічні дослідження птиці до вірусу інфекційного бронхіту курей у птахогосподарствах Луганської області).

2. Петренко, Л. Ю. Антигенна та імуногенна варіабельність вірусу інфекційного бронхіту курей [Текст] / Л. Ю. Петренко, О. О. Землянська, Д. О. Пономаренко, Л. І. Пархоменко // Вісник Сумського НАУ : наук.-метод. журн. — Суми, 2003. — № 33 (93), вип. 9 : Вет. медицина. — С. 99–101. (Дисертантка самостійно здійснила науковий пошук та аналіз літератури щодо варіабельності вірусу інфекційного бронхіту курей, брала участь у написанні статті).

3. Петренко, Л. Ю. Некоторые биологические свойства эпизоотического штамма вируса инфекционного бронхита кур [Текст] / Л. Ю. Петренко // Вет. медицина : міжвід. темат. наук. зб. — Х., 2004. — Вип. 83. — С. 185–188.

4. Петренко, Л. Ю. Культивирование штаммов вируса инфекционного бронхита кур в разных биологических системах [Текст] / Л. Ю. Петренко // Вет. науки : зб. наук. праць Луганського НАУ. — Луганськ, 2005. — № 50/73. — С. 168–172.

5. Нестерова, Л. Ю. Визначення електрофоретичних профілів білків епізоотичного і вакцинного штамів вірусу інфекційного бронхіту курей [Текст] / Л. Ю. Нестерова // Вет. науки : зб. наук. праць Луганського НАУ. — Луганськ, 2006. — № 63/86. — С. 102–107.

6. Нестерова, Л. Ю. Молекулярно-генетичний аналіз епізоотичних штамів вірусу інфекційного бронхіту курей [Текст] / Л. Ю. Нестерова, А. П. Герілович // Вет. медицина : міжвід. темат. наук. зб. — Х., 2007. — Вип. 88. — С. 159–161. (Дисертантка брала участь у проведенні ідентифікації ізолятів, узагальнила результат, брала участь у написанні статті).

7. Нестерова, Л. Ю. Морфологічні особливості епізоотичних штамів вірусу інфекційного бронхіту курей [Текст] / Л. Ю.Нестерова, Л. І. Пархоменко // Вет. науки : зб. наук. праць Луганського НАУ. — Луганськ, 2007. — № 78/101. — С. 445–448. (Дисертантка визначила морфологічні особливості ізолятів вірусу інфекційного бронхіту, узагальнила результат, брала участь у написанні статті).

8. Нестерова, Л. Ю. Вплив епізоотичних штамів вірусу інфекційного бронхіту курей на мітотичний режим перещеплюваної культури клітин Vero [Текст] / Л. Ю. Нестерова // Вісник Житомирського ДАУ : наук.-теоретич. зб. — Житомир, 2007. — Вип. 2 (19), т. 1. — С. 130–135.

9. Нестерова, Л. Ю. Визначення впливу польових і вакцинних штамів вірусу інфекційного бронхіту курей на циліарний апарат та гістоморфологію трахеї, легень, нирок [Текст] / Л. Ю. Нестерова, М. Аль Равашдех // Вет. науки : зб. наук. праць Луганського НАУ. — № 84. — Луганськ, 2008. — С. 80–84. (Дисертантка визначила вплив штамів вірусу інфекційного бронхіту курей на циліарний апарат та гістоморфологію трахеї, легень, нирок курчат, узагальнила результат, брала участь у написанні статті).

10. Нестерова, Л. Ю. Біологічні властивості штамів вірусу інфекційного бронхіту курей [Текст] / Л. Ю. Нестерова, О. О. Пащенко, М. Аль Равашдех // Вісник Полтавської ДАА. — Полтава, 2008. — № 1 : Вет. науки. — С. 149–152. (Дисертантка провела експериментальні дослідження, узагальнила результат, брала участь в оформленні статті).

11. Деклараційний патент на корисну модель № 26102 Україна, МПК С12N 7/00. Ізолят ЛІ-1 як продуцент антигену вірусу інфекційного бронхіту курей (родина Coronaviridae, Coronavirus) [Текст] / Л. І. Пархоменко, М. М. Ігнатов, Л. Ю. Нестерова; заявник і патентовласник Луганський національний аграрний університет. — № 200613813 ; заявл. 25.12.2006 ; опубл. 10.09.2007, Бюл. 14. — 8 с.

12. Деклараційний патент на корисну модель № 26692 Україна, МПК С12N 7/00. Ізолят ЛІ-2 як продуцент антигену вірусу інфекційного бронхіту курей (родина Coronaviridae, Coronavirus) [Текст] / Л. І. Пархоменко, Л. Ю. Нестерова, М. Аль Равашдех; заявник і патентовласник Луганський національний аграрний університет. — № 200613927 ; заявл. 27.12.2006 ; опубл. 10.10.2007, Бюл. 16. — 8 с.

13. Петренко, Л. Ю. Ізоляція вірусу інфекційного бронхіту курей [Текст] / Л. Ю. Петренко, Л. І. Пархоменко // Молодь за вирішення аграрних проблем XXI століття : матеріали міжнар. студ. наук. конф. — Львів, 2001. — Ч. 1. — С. 61–64. (Дисертантка провела ізоляцію з патологічного матеріалу від птиці та індикацію епізоотичних штамів вірусу інфекційного бронхіту курей).

14. Petrenko,L. Viral and bacterial parasiticinosis among farm, synanthropic and omamental birds / L. Parhomenko, N. Ignatov, L. Petrenko, O. Zemlyanskaya, D. Ponomarenko, M. Popov, Y. Zelukina // Emerging Diseases and Diseases of Complex or Unknown Etiology : 14^th World Veter. Poultry Cong. Exhibition. — Istanbul, 2005. — P. 485. (Дисертантка провела досліди, узагальнила результати щодо властивостей ізолятів вірусу інфекційного бронхіту курей, підготувала проект статті).

15. Пархоменко, Л. І. Визначення циліарної активності трахеї курчат та мітотичного режиму перещеплюваної культури клітин Vero, інфікованих штамами вірусу інфекційного бронхіту курей [Текст] / Л. І. Пархоменко, Л. Ю.Нестерова, М. Аль Равашдех : методичні рекомендації. — Луганськ, 2008. — 23 с. (Дисертантка провела експериментальні досліди, підготувала проект рекомендацій).