Анотація до роботи:

Маркєєва Н.В. Бета-дефенсин-2 в злоякісно трансформованих клітинах епітеліального походження. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 14.01.07 – Онкологія. – Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України, Київ – 2006.

Дисертація присвячена дослідженню впливу рекомбінантного бета-дефенсина-2 людини, на життєздатність та проліферацію злоякісно трансформованих клітин in vitro та особливостей експресії hBD-2 на рівні мРНК та білка в пухлинах шлунка та шийки матки людини.

В експериментах in vitrо було показано, що рекомбінантний hBD-2, який був експресований в бактеріальній системі є біологічно активним пептидом, а його вплив на життєздатність культивованих злоякісно трансформованих клітин має дозо-залежний характер: в концентраціях нижче 0,5 мкМ пептид стимулює, а у вищих за 0,5 мкМ – пригнічує життєздатність клітин. Інкубація клітин з бета-дефенсином-2 впливає на морфологні та адгезивні властивості злоякісно трансформованих клітин ліній А431 та HeLa. Встановлено, що в концентрації до 0,5 мкМ hBD-2 стимулює, а в концентраціях вищих 0,5 мкМ – пригнічує проліферацію культивованих епітеліальних клітин.

Було показано, що дія hBD-2 на рівень фосфорилювання рецептора ЕФР в злоякісно трансформованих клітинах має концентраційно-залежний характер.

Методами ЗТ-ПЛР аналіза та імуногістохімії з використанням анти-hBD-2-антитіл було показано, что в 65% пухлин шлунка виявлена експресія бета-дефенсина-2 на рівні мРНК та білка.

В клітинах карциноми in situ та плоскоклітинної карциноми шийки матки стадії Т1А гіперекспресія hBD-2 відмічена у всіх шарах епітелія в порівнянні з нетрансформованим епітелієм шийки матки.

В результаті проведеної роботи отримано рекомбінантний бета-дефенсин-2 людини та моноклональні антитіла, що дозволяють проводити аналіз продукції бета-дефенсина-2 в різних тканинах організма.

1. Встановлено, що рекомбінантний бета-дефенсин-2 має концентраційно-залежний вплив на життєздатність та проліферацію клітин епітеліального походження А431, M-HeLa, KB та MCF-7.

2. В концентрації до 0,5 мкМ hBD-2 стимулює, а в концентраціях, вищих за 0,5 мкМ – пригнічує проліферацію культивованих епітеліальних клітин.

3. Встановлена зворотня залежність між концентрацією hBD-2 та його впливом на рівень фосфорилювання рецептора ЕФР in vitro.

4. Методом ЗТ-ПЛР аналіза та імуногістохімічним методом з використанням анти-hBD-2-антитіл експресія бета-дефенсина-2 виявлена в 65% аденокарцином шлунка людини.

5. Продемонстровано, що клітинам плоскоклітинної карциноми шийки матки людини стадій Т0 та Т1А властива гіперекспресія hBD-2 в порівнянні з нетрансформованим епітелієм шийки матки.

Публікації автора:

1. Markeeva N., Lisovskiy I., Soldatkina M., Lyzogubov V., Potapov V., Usenko V., Pogrebnoy P. Involvement of hBD-2 in proliferation of malignant human cervical epithelial cells.// Experimental Oncology. – 2005. – V. 27, №4. – P.308-313. (Особистий внесок дисертанта: дослідження in vitro по визначенню дії рекомбінантного бета-дефенсина-2 на життєздатність та проліферацію культивованих клітин та статистичну обробку даних проводила особисто, приймала участь в написанні і оформленні статті).

2. Markeeva N., Lisovskiy I., Lyzogubov V., Usenko V., Soldatkina M., Merentsev S., Zaitsev S., Kondratskii Y., Tofan A., Osinskiy S., Pogrebnoy P. Expression of beta-defensin-2 in human gastric tumors.// Experimental Oncology. – 2005. – V. 27, №2. – P.130-135. (Особистий внесок дисертанта: у співавторстві з Погрібним П.В. отримала гібридому, що продукує моноклональні антитіла проти бета-дефенсина-2, обробила та оформила наукові результати, приймала участь у написанні статті).

3. Pogribnoy P.V., Lisovskiy I.L., Markeeva N.V., Shnitsar V.M., Zinchenko I.I., Soldatkina M.A. Produсtion of recombinant of hBD-2 – human antimicrobial peptide expressed in cervical and vulval cancer // Экспериментальная онкология. – 2003. – Т.25, №1. – С.36-39. (Особистий внесок дисертанта: виконувала експериментальні дослідження та обробку наукових результатів).

4. Hobta A.I., Lisovskiy I.L., Mikhalap S., Kolybo D., Romanyuk S., Soldatkina М., Markeeva N., Garmanchouk L., Sidorenko S., Pogrebnoy P.. Epidermoid Carcinoma derived Antimicrobial Peptide (ECAP) inhibits phosphorylation by protein Kinases in vitro // Cell biochemistry and function. – 2001. – №19. – Р.291-298. (Особистий внесок дисертанта: проводила культивування злоякісно трансформованих клітин, отримала лізати клітин та зразків тканин).

5. Lisovskiy I.L., Soldatkina M.A., Lytvyn D.I., Markeeva N.V., Turchak O.V., Nespryad’ko S.V., Vinnitskaya A.B., Nosach L.N., Povnitsa O.U., Pogrebnoy P.V. Pattern of expression of beta-definsin-2 (hBD-2) and EGFR mRNA in malignant cells of human cervix and vulvae // Экспериментальная онкология. – 2001. – Т.23, №4. – С.248-252. (Особистий внесок дисертанта: приймала участь в отриманні РНК із зразків пухлинних тканин).

6.Lisovskiy I.L., Soldatkina M.A., Lytvyn D.I., Markeeva N.V., Turchak O.V., Nespryad’ko S.V., Vinnitskaya A.B., Pogrebnoy P.V. Expression of defensins genes in А431 and М-Hela cell lines and in tumors of human vulval and cervical carcinoma // Экспериментальная онкология. – 2001. – Т.23, №2. – С.119-122. (Особистий внесок дисертанта: проводила культивування злоякісно трансформованих клітин, отримала РНК із зразків пухлинних тканин).

7. Лісовський І.Л., Маркеєва Н.В., Хобта А.І., Литвин Д.І., Сидорик Л.Л., Солдаткіна М.А., Погрібний П.В. Експресія гена дефенсину-6 (HD-6) у лініях пухлинних клітин людини// Биополимеры и клетка. – 2000. – Т.16, №6. – С.525-529. (Особистий внесок дисертанта: виконувала експериментальні дослідження та приймала участь в обговоренні результатів).

8. Lisovskiy I.L., Markeeva N.V., Soldatkina M.O., Pogribnoy P.V. Recombinant human beta-defensin-2 is mimicking action of EGF in epithelial cells in vitro// 5^th Parnas Conference Molecular mechanisms of cellular signalling. – Ukraine, Kiev, 2005. – P.202.

9. Маркєєва Н.В., Солдаткіна М.О., Лісовський І.Л., Погрібний П.В., Лізогубов В.В., Усенко В.С., Вінницька А.Б., Неспрядько С.В., Турчак А.В. Експресія -дефенсинів в пухлинах шийки матки та вульви // Матер. Науково - практичної конф. Нові технології в діагностиці та лікуванні хворих на онкогінекологічні захворювання.– Україна, Одеса, 2004. – С.11-15.

10.Soldatkina M.A., Markeeva N.V., Lisovskiy I.L., Podrebnoy P.V. Defensin and EGFR expression in human cervical, vulval and gastric tumors// 4^th Parnas Conference. Molecular mechanisms of cell activation: biological target enzymes. – Польща, Вроцлав, 2002. – Р. 55.

11. Pogrebnoy P.V., Markeeva N.V., Lisovskiy I.L., Soldatkina M.A. Defensin and EGFR mRNA expression in transformed human cells// 4^th Parnas Conference Molecular mechanisms of cell activation: biological signals and their target enzymes. – Польща, Вроцлав, 2002. – Р. 70.

12. Л.В.Гарманчук, В.Е.Чешук, П.В.Погребной, Маркеєва Н.В., Н.Ф.Аникусько, В.В.Зайчук, А.И.Хобта. Количественное определение рецептора эпидермального фактора роста и белка-супрессора Р53 в опухолях молочной железы с использованием метода иммунопреципитации специфическими антителами// Матеріали Х з’їзду онкологів України. – Крим, 2001. – С.36-37.

13. Lisovskiy I.L., Soldatkina M.A., Lytvyn D.I., Markeeva N.V., Nosach L.N., Povnitsa O.U., Pogrebnoy P.V. Expression pattern of defensin genes in cervical and vulval cancer cells// Intern.Sympos.Intracellular Signalling in Plant and Animal Systems. – Ukraine, Kyiv, 2001. – Р.76.

14. Lisovskiy I., Hobta A., Soldatkina M., Garmanchouk L., Markeeva N., Lytvyn D., Pogribnyi P. Detection of mRNA for beta-defensin 2 in human cell lines of epithelial origin// 18^th International Congress of Biochemistry and Molecular Biology. – Birmingham, 2000. – Р. 162.

15. Hobta A., Lisovskiy I., Soldatkina M., Markeeva N., Pogrеbnoy P. Inhibition of the protein kinases by ECAP// 26^th Meeting of the Federation of European Biochemical Societies. – Nice, 1999. – Р. 256.