129. Костенко Ірина Григорівна. Антигенні та генетичні відмінності дисоціантів вірусів поліомієліту: дис... канд. мед. наук: 03.00.06 / Національний медичний ун-т ім. О.О.Богомольця. - К., 2004.
Анотація до роботи:
Костенко І.Г.Антигенні та генетичні відмінності дисоціантів вірусів поліомієліту. – Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата медичних наук за спеціальністю 03.00.06 – вірусологія. – Національний медичний університет ім. О.О. Богомольця, Київ, 2004.
У дисертаційній роботі представлені результати досліджень по одержанню та вивченню властивостей гібридом, продуцентів моноклональних антитіл (МКАТ), здатних диференціювати дисоціанти (бентонітові варіанти) вакцинних штамів вірусів поліомієліту І, ІІ та ІІІ типу. Одержана панель МКАТ, за допомогою якої в реакції вірусної нейтралізації (РВН) доведено, що дисоціанти, які відрізняються за бентонітовим маркером, мають різний епітопний склад.
Проведено секвенування фрагментів генів, що кодують капсидні білкі VP1, VP4 та вірусну протеазу 2A. Виявлена одна заміна нуклеотиду аденін на гуанін, яка розташована в гені, що кодує білок VP1 в положенні 2900 пари нуклеотидів. Побудова амінокислотної послідовності показала, що дана заміна призводить до заміни амінокислоти аспарагіну на аспарагінову кислоту в положенні 142 капсидного білка VP1. Це в свою чергу впливає на зміни загального заряду білка, на зміну ізоелектричної точки, а також призводить до локальних змін конформації білка, та до змін деяких біологічних властивостей.
Вперше доведена генетична природа феномену дисоціації ентеровірусів. Виявлені антигенні відмінності бентонітових варіантів вакцинних штамів вірусів поліомієліту І, ІІ та ІІІ типів. Доведений зв’язок між генетичними перебудовами в капсидному білку VP1 та різним епітопним складом дисоціантів поліовірусів ІІІ типу.
1. На підставі секвенування нуклеотидних послідовностей фрагментів геному вірусу поліомієліту ІІІ типу (генів що кодують поверхневі білки VP1 і VP4 та вірусну протеазу 2А), вперше показано, що РНК варіантів Абент+ та Абент- розрізняється між собою. У варіанта Абент+ в гені, що кодує основний капсидний білок VP1, в положенні 2900 п.н. міститься нуклеотид аденін, в той час як у варіанта Абент- - гуанін. Це є прямим доказом, що явище дисоціації ентеровірусів має генетичний характер.
2. Одержана панель моноклональних антитіл, здатних диференціювати варіанти Абент+ та Абент- вакцинних штамів вірусів поліомієліту І, ІІ та ІІІ типів. Доведено, що варіант Абент- більш антигенно активний для мишей у порівнянні з варіантом Абент+.
3. З використанням одержаних МКАТ доведено, що епітопи, які знаходяться на капсидних білках дисоціантів вірусів поліомієліту і відповідають за віруснейтралізуючу активність, неоднорідні. В межах кожного типу існує принаймні три різних антигенних сайта зв’язування з МКАТ, що призводять до нейтралізації інфекційності.
4. Шляхом побудови амінокислотної послідовності білка VP1 доведено, що виявлена заміна нуклеотидів призводить до заміни аспарагіну на аспарагінову кислоту в положенні 142 в складі білка варіанта Абент-. Це, в свою чергу приводить до зміни заряду поверхневих білків і сорбційної активності віріонів.
5. Науково обґрунтовано метод селекції бентонітових варіантів вірусів поліомієліту, сталих в генетичному відношенні і придатних для молекулярно-генетичних досліджень.
Публікації автора:
1. Костенко І.Г. Обґрунтування нових методичних підходів до одержання стабільних дисоціантів поліовірусів // Молодіжний журнал. – 2002.- №1. – С. 46-49.
2. Широбоков В.П., Костенко І.Г., Ніколаєнко І.В. Антигенні відмінності генетичних варіантів Абент+ та Абент- вакцинного штаму поліовірусу ІІІ типу // Мікробіологічний журнал. – 2003. – Т.65, - №4. – С. 29-37.
3. Широбоков В.П., Костенко І.Г. Диференціація бентонітових варіантів поліовірусів за допомогою моноклональних антитіл // Журнал АМН України. – 2003. – Т.9, №4. – С.780 – 790.
4. Костенко І.Г., Журавель О.В., Панасенко Г.В., Широбоков В.П.. Генетична детермінованість феномену дисоціації поліовірусу ІІІ типу // Біополімери та клітина. – 2004. –Т.20, №3. – С.255 – 258.
5. Костенко І.Г., Ніколаєнко І.В. Нові підходи до вивчення дисоціації поліовірусів за афінітетом до бентоніту // Збірка тез доповідей 56 наукової конференції студентів та молодих вчених Національного медичного університету ім. О.О. Богомольця з міжнародною участю, присвяченої 160-річчю НМУ ім. О.О. Богомольця (17-20 квітня 2001 р., м. Київ, Україна). - С. 126.
6.Ніколаєнко І.В., Костенко І.Г. Антигенні відмінності бентонітових варіантів поліовірусів // Біотехнологія. Освіта. Наука: Збірка тез доповідей І Всеукраїнської науково-практичної конференції студентів, аспірантів та молодих вчених (10-11 лютого 2003 р., м. Київ, Україна)/Укл.: І.В.Повстянко, О.Ю. Галкін. – К.: Видавництво “Політехніка”, 2003. - С. 91-92.
7. Костенко І.Г. Генетичні відмінності дисоціантів поліовірусів // Актуальні проблеми сучасної медицини: Збірка тез доповідей 58 науково-практичної конференції студентів та молодих вчених Національного медичного університету ім. О.О. Богомольця з міжнародною участю (28-31 жовтня 2003 р., м. Київ, Україна).- С.43.
8. Широбоков В.П., Костенко І.Г. До механізму дисоціації ентеровірусів // Збірка тез доповідей Х З’їзду Товариства мікробіологів України (15-17 вересня 2004 р., м. Одеса, Україна). – С.9.
