Романюк Світлана Іванівна. Антигенні й імунобіологічні властивості дифтерійного токсину та його субодиниць: Дис... канд. біол. наук: 02.00.10 / НАН України; Інститут біоорганічної хімії та нафтохімії. - К., 2002. - 162арк. - Бібліогр.: арк. 120-158.
Анотація до роботи:
Романюк С.І. Антигенні й імунобіологічні властивості дифтерійного токсину та його субодиниць. – Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 02.00.10 – біоорганічна хімія. – Інститут біоорганічної хімії та нафтохімії НАН України, Київ, 2002.
Дисертація присвячена дослідженню антигенних властивостей дифтерійного токсину (ДТ) і його субодиниць у дітей з різними формами дифтерійної інфекції та після вакцинації, а також імунобіологічної активності ДТ, яка дозволяє йому протидіяти імунній системі. Розроблено імуноферментні методи виявлення ДТ і антитіл проти нього, які можуть бути використані для вдосконалення діагностики дифтерії. Створено комп’ютерну програму для кількісної оцінки результатів імуноблотингу. Проаналізовано сироватки крові дітей різних діагностичних груп щодо вмісту ДТ, антитоксичних антитіл та їх специфічності до субодиниць ДТ. Встановлено, що антитіла хворих на дифтерію та носіїв відрізняються за специфічністю до субодиниць А і В ДТ. Запропонована математична модель дифтерійної інфекції, яка може бути використана для розрахунку терапевтичних доз антитоксичної сироватки коня. Вперше показано, що ДТ здатен проникати в фагоцити і специфічні до нього В-лімфоцити навіть за відсутності класичного рецептора для ДТ.
У дисертаційній роботі встановлені антигенні властивості ДТ і його субодиниць при різних формах дифтерійної інфекції у дітей, а також виявлені імунобіологічні властивості ДТ, які дозволяють йому протидіяти факторам імунного захисту.
Розроблено імуноферментний метод виявлення ДТ з використанням біотинильованих похідних F(ab)2-фрагментів антитіл коня та кон’югату стрептавідину з полімерною пероксидазою, який виявився достатньо чутливим для застосування його у діагностиці дифтерії. Одночасне визначення вмісту в сироватці крові ДТ і антитіл проти нього дозволяє досягти чутливості діагностики 84% та специфічності – 93%.
За допомогою розроблених методів виявлення ДТ і антитіл проти нього встановлено, що завдяки сильним антигенним та імуногенним властивостям природного ДТ відбувається активний синтез антитіл проти нього у 72,2% носіїв токсигенних дифтерійних бактерій і у 56,8% хворих на дифтерію, хоча ДТ у вільній формі переважно виявляється тільки в сироватках крові хворих на дифтерію.
Показано, що імунне розпізнавання окремих субодиниць ДТ при дифтерійній інфекції та після вакцинації відрізняється: у хворих на дифтерію у 57 % випадків утворюються антитіла переважно до субодиниці А ДТ, а у носіїв дифтерійних бактерій і, особливо, у хворих на інші захворювання та здорових дітей, імунізованих дифтерійним анатоксином, в сироватці крові частіше переважають антитіла до субодиниці В.
Встановлено, що ДТ може проникати у В-лімфоцити через специфічні до нього імуноглобулінові рецептори та у фагоцити шляхом неспецифічного поглинання та викликати загибель цих клітин навіть за відсутності у них класичного рецептора для ДТ, що свідчить про потенційну здатність токсину пригнічувати гуморальну імунну відповідь, спрямовану проти нього, та перешкоджати виконанню фагоцитами захисних функцій в організмі.
Запропонована математична модель дифтерійної інфекції, що описує динаміку ДТ і головних захисних чинників організму, дозволяє моделювати форму протікання інфекції, якісно оцінювати вплив різноманітних факторів на перебіг захворювання і може знайти застосування при розрахунку індивідуальних доз протидифтерійної сироватки крові коня в залежності від тривалості інфекції та даних про рівень ДТ і антитоксичних антитіл у сироватці крові хворого.
Створена денситометрична комп’ютерна програма, що дозволяє кількісно оцінювати результати імуноблотингу, також може бути застосована для аналізу результатів одномірного електрофорезу, авторадіографії тощо.
Публікації автора:
Крамарев С.А., Литвиненко Н.Г., Буц А.Р., Кавун Э.М., Колибо Д.В., Романюк С.И., Джеджула Г.Г., Радавский Ю.Л., Комиссаренко С.В. Значение обнаружения токсина в крови при дифтерийной инфекции у детей // Лабораторная диагностика. – 1998. № 3. – С. 21-24.
Литвиненко Н.Г., Буц О.Р., Радавський Ю.Л., Кавун Е.М., Колибо Д.В., Романюк С.І., Михальський Л.О., Фуртат І.М. Значення виявлення токсину та антитоксину в крові при дифтерійній інфекції у дітей // Дитячі інфекції. – 1999. № 25. – С. 47-54.
Литвиненко Н.Г., Буц О.Р., Дорошенко В.О., Головач О.В., Бадакіна І.Г., Радавський Ю.Л., Кавун Е.М., Колибо Д.В., Романюк С.І. Оцінка гуморального антитоксичного імунітету при дифтерії у дітей // Дитячі інфекції. – 2001. № 28. – С. 16-22.
Романюк С.И., Колибо Д.В., Кавун Э.М., Радавский Ю.Л., Ткаченко Т.Ю., Крамарев С.А., Комиссаренко С.В. Специфичность антител к субъединицам дифтерийного токсина у детей с различным диагнозом // Український біохімічний журнал. – 2001. – Т. 73, № 6. – С. 73-76.
Колибо Д.В., Романюк С.И. Математическая модель инфекционного процесса при дифтерии. Подходы к определению терапевтической дозы антитоксической противодифтерийной сыворотки // Український біохімічний журнал. – 2001. – Т. 73, № 2. – С. 144-151.
Колибо Д.В., Романюк С.И., Радавский Ю.Л., Крамарев С.А., Комиссаренко С.В. Влияние дифтерийного токсина на фагоциты и В-лимфоциты чувствительных и нечувствительных к нему животных // Український біохімічний журнал. – 2002. – Т. 74, № 2. – С. 30-36.
Крамарєв С.О., Литвиненко Н.Г., Буц О.Р., Кавун Е.М., Колибо Д.В., Романюк С.І. Вивчення рівня дифтерійного токсину при дифтерійній інфекції в дітей // Актуальні питання клінічної інфектології. Матеріали V з’їзду інфекціоністів України (7-9 жовтня, Тернопіль). – 1998. – С. 244-246.
Romanyuk S.I., Vovk V.V., Kolibo D.V., Kavun E.M., Radavsky Yu.L., Kramarev S.A. Specificity of Serum Antibodies to Subunits of Diphtheria Toxin in Children with various Diagnostic Categories // Fourth John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology (14-18 September, Pushchino). – 1998. – Р. 67.
Крамарєв С.О., Литвиненко Н.Г., Буц О.Р., Радавський Ю.Л., Кавун Е.М., Колибо Д.В., Романюк С.І., Михальський Л.О., Фуртат І.М. Визначення токсину та антитоксину в крові при дифтерійній інфекції у дітей // Матеріали X з’їзду педіатрів України (13-16 жовтня, Київ). Педіатрія, акушерство та гінекологія. – 1999. № 4. – С. 42-43.
Романюк С.І., Колибо Д.В., Кавун Е.М. Специфічність антитіл до субодиниць дифтерійного токсину у дітей різних діагностичних груп // Тези Конференції молодих вчених “Актуальні проблеми фундаментальної та прикладної біохімії – 2000” (24-25 травня, Київ). Український біохімічний журнал. – 2000. – Т. 72, № 6. – С. 136.
Колибо Д.В., Романюк С.І., Кавун Е.М. Математична модель інфекційного процесу при дифтерії. Підходи до визначення терапевтичної дози антитоксичної протидифтерійної сироватки // Тези Конференції молодих вчених “Актуальні проблеми фундаментальної та прикладної біохімії – 2000” (24-25 травня, Київ). Український біохімічний журнал. – 2000. – Т. 72, № 6. – С. 133.
Kolibo D.V., Romanyuk S.I. Determination of diphtheria toxin and antitoxin in serum and specificity of antibodies to toxin subunits in children // International Training Course for Young Scientists organized by the Hungarian Society for Microbiology and the Unesco-Hebrew University of Jerusalem International School for Molecular Biology and Microbiology (August 23-27, Keszthely, Hungary). – 2000. – P. 30.
